第十章高效液相色谱法1.pptVIP

第十章 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography （ HPLC ） HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长 无法在线检测 2．HPLC：分离和分析 柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱） 高压输送流动相 柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短 可以在线检测 HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC: 溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% 续前 2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） HPLC的特点 1 高效能； 高速度；高灵敏度； 2 高度自动化 3 流动相可选择性范围宽 4 适用范围广：样品不受挥发性及热稳定 性的限制，只要求样品能制成液体 。 5 流出组分易收集。 HPLC的类型 分配色谱 吸附色谱，又称液固色谱 离子交换色谱 尺寸排斥色谱，又称凝胶色谱 §10-3 分配色谱 分配色谱分为：液液色谱和化学键合色谱 一、液-液分配色谱法（LLPC） 在液-液色谱中,流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物． 1．分离原理 液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数．所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分． 2．固定相 由于液液色谱中流动相参与选择竞争，因此，对固定相选择较简单．只需使用几种极性不同的固定液即可解决分离问题． 　　 　为了更好解决固定液在载体上流失问题．产生了化学键合固定相．它是将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法． 3．流动相 在液液色谱中为了避免固定液的流失．对流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越显著越好． 　　 根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱． 二、键合相色谱 采用化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱．由于键合固定相非常稳定，在使用中不易流失，适用于梯度淋洗，特别适用于分离容量因子k值范围宽的样品．由于键合到载体表面的官能团可以是各种极性的，因此它适用于种类繁多样品的分离． 化学键合固定相：利用化学反应，通过化学键把各种不同的有机分子键合到载体表面上所形成的固定相称为化学键合固定相