[经济学]第五章 毛细管电泳.pptVIP

第五章 毛细管电泳 高效毛细管电泳分析 high performance capillary electrophoresis 高效毛细管电泳的特点（书P144有6点） 5.1.2 高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 电渗现象与电渗流 2.HPCE中的电渗现象与电渗流 3.HPCE中电渗流的大小与方向 HPCE中电渗流的方向 4. HPCE中电渗流的流形 5. HPCE中电渗流的作用 HPCE中影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 HPCE中的参数与关系式 3.分离度 5.2 高效毛细管电泳仪 仪器流程与主要部件 1.高压电源 3.缓冲液池 毛细管电泳的进样方式 2. 电动进样方式 5.3 分离模式 一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE 二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 三、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 四、毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing，CIEF 5.5 毛细管电泳的应用 阴离子分析 药物分析 analysis of pharmaceutics 手性化合物分析 氨基酸与蛋白质分析 蛋白质分析 核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA 新进展advances and special topics 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 5.色谱与电泳分离模式的结合。 3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围； 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零； 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离； 5. 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液； 6. 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测； 7. 电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。 阳离子分析 迁移方向和电渗流方向一致； 4.5min内分离了24种金属离子； 阳极进样，阴极检测； 具有很高的灵敏度； 阴离子电泳方向和电渗流方向相反、速度接近，分析时间长、效率低； 质量小、电荷密度大的离子如：SO4-2、Cl-、F-等，电泳速率大于电渗流，阳极端流出，在阴极端无法检测； 加入电渗流改性剂，十六烷基三甲基溴化胺等，使电泳方向和电渗流方向一致，可在3.1min内分离36种阴离子；阴极进样，阳极检测； 离子价态及存在形态分析； 检测体液或细胞中某些代谢产物的分析； 尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段； 采用毛细管区带电泳方式，在11min内分离17种药物； 采用MEKC模式，鉴定违禁药物；效果优于HPLG法 合成获得单一手性化合物相当困难；528种手性合成药物，61中以单一对映体形式销售，其他为外消旋体；检测分析也相当困难；研究热点； R-反应停是安眠药，S-式致胎儿畸形； HPCE分离分析手性化合物的方法：加入手性选择剂； 形成配合物的稳定常数有差异，结合HPCE的高效率； 常用手性选择剂：环糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性剂（氨基酸衍生物、胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性表面活性剂） 采用MEKC模式，在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸； HPCE可取代传统的氨基酸分析仪； 问题：吸附和检测； 重要分析手段； 图，酶解的双螺旋DNA限制性片段的分离； * 主要内容 High performance capillary ele