[医学]15遗传性疾病的分子诊断.pptVIP

全国高等学校医学规划教材－分子诊断学 第十五章 遗传性疾病的分子诊断 基因工程研究所 南方医科大学 教学目的与要求 了解遗传性疾病分子诊断的方法学评价及产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷分子诊断的适应症。 熟悉遗传性疾病的分子机制及分子诊断的标准化。 掌握遗传性疾病及产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的经典检测方法及临床意义。 重点遗传性疾病及产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的经典检测方法及临床意义。 难点遗传性疾病的分子机制。 本章目录 第一节 遗传性疾病分子诊断的策略*** 第二节 遗传病的分子诊断 第三节 产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的分子诊断**** 第一节 遗传性疾病分子诊断的策略* 一、直接诊断策略 二、基因多态性连锁分析 三、基因突变的定量（dosage）诊断 一、直接诊断策略 (一)点突变的诊断 1、 基因背景清楚的点突变 等位基因特异性寡核苷酸杂交(allele specific oligonucleotide, ASO) PCR-ELISA 等位基因特异性扩增(allele specific amplification, ASA PCR-RFLP 测序 基因芯片技术等进行诊断 2、基因背景未知的点突变 单链构象多态性(single-strand conformational polymorphism, SSCP) 变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE) 异源双链分析(heteroduplex analysis, HA) DNA序列测定 蛋白截短测试（protein truncation test, PTT） (二)片段性突变的检测 （1）少数核苷酸缺失或插入 检测点突变的方法 （2）大的片段突变 Southern印迹技术、多重PCR技术。 二、基因多态性连锁分析 三、基因突变的定量诊断 检测方法：细胞分裂中期染色体检测 固相杂交 PCR 扩增 第二节 遗传病的分子诊断 一、血红蛋白病 二、血友病 三、肌营养不良症 四、苯丙酮尿症 五、囊性纤维化 六、亨廷顿病 七、脆性X综合征 一、血红蛋白病 ?珠蛋白基因簇 分子诊断方法 限制性内切酶法（RE） ASO ARMS、 跨越断裂点的PCR (裂口PCR、gap-PCR) 思考题（作业） 书中239页中关于HbE检测请回答下列问题 （1）HbE的突变碱基改变情况 (2) 该突变位于蛋白质的第几个氨基酸 （3）突变位点位于氨基酸哪一个外显子上 （4）写出基因组参考序列中此外显子后的内含子序列（5’和3’端各5个碱基） (5) 用MnlI酶切后，请列出各种可能的情况 （6）结合所学习的知识，请再写出几种可能用于诊断的方法。 2.地中海贫血 由于珠蛋白链的合成不平衡所造成的一类常见的单基因遗传性、溶血性疾病。 类型： α地中海贫血， β 地中海贫血， γ 地中海贫血， δ 地中海贫血，以此类推。 α地中海贫血 每条16号染色体上有两个αGene——缺失程度不同，α链合成部分或完全受到抑制，导致不同类型的地贫。 若一条染色体上缺失一个α基因（／α－）为α+地贫，α链合成减少。 若一条染色体上两个α基因均缺失（ ／－－）为α0地贫，α链不能合成。 α地贫的分子基础 依α基因缺陷程度分为： Gene缺失型（缺失1～４个α基因） 非Gene缺失型（点突变）：无义突变、移码突变、终止密码突变、剪接突变等 结果 1 生成无功能或稳定性降低的mRNA 无义突变 移码突变 终止密码突变 起始密码突变 2 RNA加工突变 3 产生不稳定Hb α地中海贫血的分子机制 分子诊断方法 (1) PCR法 PCR 法已经成为鉴别缺失型α 地中海贫血的首选方法。 (2) ARMS法 该法能快速鉴别诊断HbC S和HbQ S (3) ASA法 与ARMS 法相类似 (4) SSCP法 非缺失型α2 地中海贫血突变 (5) 等位基因特异性扩增技术(ASPCR）法 β地中海贫血 β珠蛋白Gene 突变或缺失→β珠蛋白链合成速 率下 降→溶血性贫血 β0 地贫：β链完全不能合成 β+ 地贫：β链可部分