论文开题报告-成人隐匿性自身免疫性糖尿病多因子联合检测与临床应用演示幻灯.pptxVIP

成人隐匿性自身免疫性糖尿病多因子联合检测与临床应用南通大学硕士开题报告姓 名朱晓丽导 师汪晓莺教授目录1选题背景及意义2研究内容加方法3实验创新及难度4进度和完成情况选题背景及意义LADA简介：糖尿病已经成为继恶性肿瘤和心脑血管疾病的第三大健康威胁。我国已成为糖尿病第一大国，患者数近1亿。绝大多数糖尿病患者分为1型（TIDM）2型糖尿病(TIDM)，TIDM主要是指因自身免疫性因素导致胰岛β细胞破坏以及胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病；T2DM则是以胰岛素抵抗为主，伴有β细胞进行性衰竭和胰岛素分泌进行性下降。近年来研究发现，在初诊为T2DM的患者中，有部分患者在半年到几年内发展为依赖胰岛素治疗的TIDM。1998年WHO提出将这类患者命名为成人晚发型自身免疫性糖尿病（Latent autoimmune diabetes in adults）,即LADA。112LADA特征LADA是一种成人发病的1型糖尿病，而不是一种独立病种，也不是1型和2型之间的过度状态。它与儿童发病的TIDM相比，起病晚，隐匿，发展相对缓慢，早期不依赖胰岛素，饮食、运动控制和口服降糖药有效，貌似T2DM临床表现，临床上常当作T2DM来治疗。但经数年后本病大量胰岛素衰竭，需要依赖大剂量胰岛素，且极易发生多种并发症，病情不易控制，此特征与TIDM类似。近年来研究还发现，该病早期即给予胰岛素治疗可以保护残存胰岛β细胞功能，延缓病情进展和并发症的发生。因此，早期诊断、早期治疗、延缓胰岛细胞功能进展是临床上亟待解决的课题。LADA的诊断目前国内外比较公认的诊断标准，国际糖尿病免疫学会（IDS）对LADA的诊断建议基于3条标准：（1）成年人起病；（2）诊断糖尿病后至少半年不依赖胰岛素治疗；（3）胰岛自身抗体阳性。所以，胰岛自身抗体是目前筛查和诊断LADA的主要免疫学手段。常见的胰岛自身抗体包括： GADA(谷氨酸脱羧酶抗体) IA-2A（蛋白酪氨酸磷酸酶2自身抗体） IAA（胰岛素自身抗体） ZnT8A（锌转运体-8自身抗体） ICA(胰岛细胞抗体)： CHPA（羧基肽酶H）：这几种抗体在初诊T2DM患者中阳性率、阳性重叠率以及对患者胰岛功能的影响各不相同，仅仅靠其中一种检测易引起LADA的漏诊。为提高LADA阳性筛查效率，做到早诊断早治疗，并更准确地检测胰岛功能，联合抗体检测可提高LADA诊断的敏感性。本研究就是把现在热门的液体芯片技术跟这四种抗体联合检测相结合，灵敏、准确、快速地一次性检测四种抗体，从而大大提高LADA的临床诊断水平以及更好的监测疗效。4液体芯片美国Luminex 公司开发出的液态芯片技术平台是一种全新概念的生物芯片。该技术的核心是把微小的乳胶颗粒（5.6um）用荧光染色的方法进行编码，每种颜色的微粒（或称为荧光编码微粒）代表一种检测标志物。应用时，把针对不同检测物的彩色编码微粒混合后再加入微量病人标本，在悬液中靶分子与微粒进行特异性地结合。最后用激光流式仪判定后由电脑以数据信息的形式记录下来。因为分子杂交或免疫反应是在悬浮溶液中进行，检测速度极快，而且可以一个微量液态反应体系中同时检测100个指标。Luminex公司称之为“xMap”技术，这个词用中文很难翻译。又因含微粒的溶液肉眼观是澄清透明的，所以又有liquidchip,液态芯片之称。该仪器在我国SFDA进口注册时被称为“多功能流式点阵仪”。液体芯片原理液体芯片优点在于： 1．高通量：仅需微量样本(10μm )，最多 100个指标。 2．高速度：最快可达 10 000测试／h。3．低成本：试剂用量少，能有效降低临床应用的试剂成本。4．灵敏度高：检测低限可达 pg／ml。 5．重复性好 ：每个指标有 5 000个反应单元 ，分析 100 次取平均值。6．线性范围广 ：检测范围达 6个数量级。 7．操作简便 ：无需洗涤：减少误差来源。液体芯片作为最新一代的多指标并行检测技术平台，具 有检测速度快、结果准确性高、操作简便、功能强大 、成本低 廉等诸多优点，可广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分 析、受体和配体识别分析等研究 ，在临床诊断、生物医学 (包 括基因组学、蛋白质组学)研究等领域都有着广泛的应用 ，代 表着生命科学基础研究和医学诊断技术的发展方向。研究方法1.文献研究法：搜集整理相关研究资料，为研究做准备；2.标本收集；3. 应用液体芯片技术联合检测LADA患者血清中GADA、IAA、ICA、IA-2A、ZnT8A、CPHA的水平，制备交联微球以及生物素标记抗体．利用双抗体夹心法对80个血清样本进行测定。并将其结果与酶联免疫法（ELISA）结果进行相关性分析，及各种抗体最佳组合的分析。2研究方法① 微球编码：在其制作过程中按照严格的精确比例掺 人了两种不同的红色分类荧光染料，每种染料各