病毒的接种-新乡医学院教材幻灯片.pptVIP

精品PPT课件 浏览免费 下载后可以编辑修改。 /jnejclxh /see161 / / / 病毒的接种 新乡医学院微生物学教研室 实验目的 了解 病毒的培养方法 掌握 病毒的鸡胚绒毛尿囊膜接种法及小鼠脑内接种方法。 概述 病毒结构简单，缺乏完整的酶系统，不能在无生命的人工培养基中生长，必须在活的组织细胞中才能增殖。 动物接种法 鸡胚培养法 组织细胞培养法 常用的分离、培养、鉴定病毒的方法 动物接种 动物接种（Animal inoculation）是最早应用的病毒培养法，在病毒学研究中主要有三方面用途：分离鉴定病毒、通过传代增殖或减弱病毒毒力、制备免疫血清。在分离病毒时由于动物自身可能带有病毒，而且许多病毒没有敏感动物，因而目前多被组织培养所代替。 常用的动物有小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、家兔、羊和猴等。接种的途径有鼻内、皮内、脑内、腹腔内和静脉注射等。 小鼠脑内接种 1、以无菌0.25ml注射器抽取流行性乙型脑炎病毒悬液0.1ml，去除注射器内的气泡。 2、取出小鼠，左手将小鼠固定（固定时用大拇指和食指握住小鼠的头部，左手手掌轻轻按住小鼠的体部）。 3、右手用棉签蘸以碘酒，消毒小鼠的右侧颞部皮毛（不碰到眼）。 4、右手拿注射器在小鼠颞部（眼与耳根联线的中点略偏耳朵的方向）注入，进入颅腔即可（一般进针2－3mm），不要插得太深，注射量为0.02－0.03ml。 5、注射完毕，将用过的注射器放入煮沸消毒器内，煮沸消毒。实验动物置于防蚊设备的室内饲养，逐日观察动物发病情况。 鸡胚接种 接种途径 可根据病毒种类选择适宜接种部位，如分离流感病毒常用羊水囊和尿囊同时接种法，而痘病毒常采用绒毛尿囊膜接种法 尿囊腔接种法 卵黄囊接种法 绒毛尿囊膜接种法 羊膜囊接种法 气　室 鸡　胚 卵黄囊 尿囊腔 羊膜腔 绒毛尿囊膜 卵　白 卵膜 判断鸡胚是否存活 ⑴ 在检卵灯下观察能否看到清晰的血管； ⑵ 胚胎是否移动； ⑶ 若胚龄过长，则需观察其胎盘部分，胎盘部分变苍白说明胚胎死亡，正常时胎盘发暗，蛋白部分透亮。 取卵壳：消毒后取下所画三角形区域的卵壳，注意卵膜不要碰破，于卵膜中央刺一小口（不要伤及绒毛尿囊膜）， 造人工气室：在自然气室部分用大注射器针头钻一孔，用橡皮头自气室端小孔将气室中空气吸出，使绒毛尿囊膜下陷形成一“人工气室” 接种：去除卵膜，于绒毛尿囊膜上滴上病毒0.1~0.2ml。 封口：用胶布封口，胶布事先用碘酒消毒，并通过火焰烧去余碘。 培养：放入温箱培育4天，然后收获病毒。