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纸上层析 Paper Chromatography  目录 一 纸色谱法的基本理论 二 几种特殊类型的纸色谱法 三 应用举例 原理：根据溶质A在流动相与固定相（纸纤维中吸着的水分）中的分配系数不同，流动相因毛细现象沿纸上升，KD大的前进慢，KD小的上升快，因而溶质得到分离。 氨基酸的Rf值 展开剂 正丁醇+吡啶+水 0.20 0.29 0.60 0.20 0.33 0.24 1 : 1 : 1 正丁醇+醋酸+水 0.23 0.23 0.70 0.28 0.22 0.11 12 : 3 : 5 3. 温度的影响 三. 纸色谱法的基本操作 3.1 纸的准备 3.2 点样 3.3 展开 3.4 显色及定位 3.5 定量 3.1 纸的准备 一般纸色谱法使用的滤纸应具备以下条件： （1） 滤纸中应不含有水或有机溶剂能溶解的杂质。 （2） 滤纸被溶剂浸润时，不应有机械折痕和损伤。即应具有一定的强度。 （3）?滤纸对溶剂的渗透速度应适当，渗透速度太快时易引起斑点拖尾，影响分离效果，速度太慢时，耗费时间太长。 （4）?纸质应均一，否则会影响实验结果的重复性，特别是定量实验中这点更是重要。 层析纸按需要剪裁成长条形（或筒型） 3.3 展开 3.4 显色及定位 经上述展开至溶剂前沿到达纸的另一端时，即可将纸取出，待溶剂挥干后用适宜方法确定组分斑点的位置 3.5 定量 1.洗脱测定法 操作步骤多，测定时间长，但洗脱法不需要贵重仪器设备、测定结果有较好的准确度。 2 直接测定法 a 目测法 样品经分离后，直接观察所得斑点的大小和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近似地判断样品中所测成分的含量。（误差较大） b 测面积法 展开后色谱上的斑点面积与化合物含量间存在一定关系，所以可以用测定斑点面积的方法来测定样品含量。 c 仪器测定法 纸色谱中纸为半透明物体，故可以用类似于分光光度计结构的光密度计（ densitometer ）扫描滤纸，测定透光强度的变化而定量。 四. 应用举例 (一)分离和分光光度法测定氯原酸 (二)用色谱法测定岩石及矿物中金、锑 硒、砷、铊（铋） (三)贵金属元素的反相纸色谱分离研究 (一)??? 分离和分光光度法测定氯原酸 1． 搞要 氯原酸是杜仲、金银花等多种中草药抗菌消炎的有效成份之一。氯原酸的测定有多种方法，本文用纸色谱法的分离条件和氯原酸的配位效应进行显色的有关参数，建立了测定氯原酸的可见分光光度法。方法具有仪器简单、灵敏度高、选择性好、快速准确、容易普及等优点。 2 实验部分 a 仪器和试剂 色谱用滤纸（杭州新华纸业有限公司） 721型分光光度计（上海分析仪器三厂） KQ—1500型超声波发生器（昆山市超声仪器有限公司）等。 b 样品预处理和测量 吸取 5.0000g 干燥杜仲叶粉末，加蒸馏水浸泡 24h ，超声波振荡处理 3 次，每次 30min，合并滤液，定容于 100ml 容量瓶中。吸取 50ul 提取液，点样于色谱滤纸上，用正丁醇-水-冰醋酸（4：2：1，V/V）作展开剂，按常规操作展开，风干滤纸，在 365nm 紫外分析仪上点划出淡蓝色荧光斑点，剪下，并剪成细条状，收集于 20ml具塞刻度试管中，加 10ml 蒸馏水，超声波振荡处理 15min ，所得溶液测量吸光度A。 3．? 结果与讨论： a)?显色吸收光谱 紫红色络合物的吸收光谱，最大吸 收波长为 526nm。 b)?显色化合物的稳定时间 室温加入乙醇，然后显色， 显色化合物的吸光度在 1.5h 内无变化,完全能够满足测定的要求。 c)?杜仲叶提取氯原酸的纸色谱分离 对杜仲叶提取液 的纸色谱分离展开剂进行了不同组成和配比的对比实验，其中以正丁醇-醋酸-水（4：1：2，V/V）分离效果最好，可使氯原酸与干扰物质完全分离。氯原酸的Rf 值为 0.75。 (二)贵金属元素的反相纸色谱分离研究 文献研究了以不同浓度 P350 和P507 (含磷的萃取剂)为固定相，不同展开体系为流动相的Au、Rh、Ru、Pd等 6 种贵金属离子的反相纸色谱行为，讨论了温度对 Rf 值的影响，并获得了某些多组分混合体系的良好分离。 ?仪器与试剂 ：2 ×24c