FISH技术-2.ppt

FISH结果判定、处理 1、信号定位性： 定位：胞浆： 胞核： 细胞或组织类型定位性： 2、对照的设定：重点是阴性对照 探针： 突变探针： 染色体原位杂交：标准细胞系、染色体特异探针 3、结果定量分析： 半定量： 绝对定量： FISH结果采集与处理 FISH结果采集与处理 FISH结果采集与处理 影响原位杂交其它主要因素 组织制片： DNA、RNA降解 影响组织脱蜡、水化---组织透性 组织切片前处理：脱蜡、水化充分 合适的蛋白酶处理 结果判断：阳性定位 对照设置：合适的对照 FISH技术的可能错误 FISH技术的可能错误 过低严格度（stringency）洗涤 ：非特异杂交 缺乏对照确定探针的特异性和敏感性 选择了不当的探针 (DNA versus RNA probes) 不当的检测方式 (colorimetric versus radioactive versus fluorescence) 假阴性 ：DNA杂交 FISH技术特点 1、探针： 基因组探针：长度100 – 900 kB；来自YAC，BAC或P1克隆 重复序列探针：着丝点、端粒、Alu序列、小或微卫星序列。PCR或化学合成 2、标记方式：直接标记；间接标记； 3、标记方法：化学合成；酶促合成； FISH技术的优点 定量性 定位性 多参数 FISH技术检测内容 1、基因扩增 2、染色体易位：染色体断裂与基因融合 3、染色体丢失 4、染色体获得 5、染色体倍体或核性异常 6、染色体显带 7、端粒长度变化 FISH技术类型 1、FISH: 常规FISH：mono-, dual-, triple-, multi-color； M-FISH、SKY或COBRA-FISH：计算机成像 2、CGH: comparative genomic hybridization 3、Chromosome painting及Chromosome banding 4、Centromere-FISH 或CentM-FISH：着丝点-FISH 5、Telo-FISH：端粒-FISH 6、Interphase-FISH: 间期核-FISH 7、3-D-FISH：三维-FISH FISH技术类型 一、检测部位： 1、全染色体： Chromosome painting 2、特异位点：local-specific 3、特殊位点：着丝点、端粒、亚端粒 4、多位点： Chromosome banding 二、荧光: 单色、多色 三、染色体或间期核 染色体异常及检测技术 a | Painting probes stain entire chromosomes. b | Regional painting probes. c | Centromeric-repeat probes are available for almost all human chromosomes. Because of their ease of use and high signal intensities, these probes are popular for counting chromosome copy numbers in interphase nuclei. d | Subtelomeric probes, which are often used to screen for cryptic translocations that are not usually visible in conventional chromosome-banding analyses, are shown in this example. e | Special probe sets f | Genomic DNA is used as the probe in comparative genomic hybridization (CGH) to establish copy number. g | For high-resolution analysis, DNA fibres can be used as the target for probe hybridization. h | Microarrays can be used as targets for hybridi