分子生物学第10章+分子生物学技术.ppt

基因工程的操作包含以下步骤： ? 获得目的基因 ? 构造重组DNA分子 ? 转化或转染 ? 表达 ? 蛋白质产物的分离纯化 基因工程的三大理论发现： 生物的遗传物质是DNA DNA的双螺旋结构和半保留复制机制 遗传密码子的破译 技术上的四大发明 cos位点的两个作用： 使进入细菌的DNA分子成为环状 。 作为识别位点，由内切酶将原噬菌体从细菌基因组切下来 。 功能相关的基因呈簇排列在基因组上。 外壳蛋白所包装的DNA长度应是野生型噬菌体的76-105%。 原位杂交法筛选DNA重组体图解 ⑴ 分离纯化基因组DNA 从生物组织或细胞中提取基因组DNA ⑵ 制备全部基因组的DNA片段 ①机械断裂法 用超声波或高速搅拌DNA溶液 断裂片段两端没有与克隆载体匹配的粘末端, 因此插入载体之前还需要进行修饰加工，少用 ②限制性内切酶降解 常用Sau 3A和Mbo I 断裂片段两端有与克隆载体匹配的粘末端，可以直接与处理过的载体连接。 （3） 载体DNA的制备 选择适当的载体用限制酶切开，得到左右两臂，以便分别与DNA片段的两端连接 常用载体：柯斯质粒，λ噬菌体，酵母人工染色体 （4）DNA片段与载体的连接包装 基因组DNA片段+λ噬菌体—重组DNA—包装成噬菌体—感染细菌 噬菌斑