聚合酶链式反应及其在基因诊断中的应用教材_课件.ppt

聚合酶链式反应及其在基因诊断中的应用;;PCR反应的特点;一、PCR反应原理和反应过程;PCR原理;延伸;;94 ?C (30 s);94 ?C (30 s);;1 模板;2、引 物(Primers) ;设计引物的原则:;3、脱氧核苷三磷酸(dNTP) ;4、DNA聚合酶;;;5、镁离子浓度;6、其它反应因素 ;(二)PCR的反应条件 ;1、温度 ;2、时间 ;3、循环次数 ;指数增长期 线形增长期 平台期;;三、PCR技术的质量控制;;;PCR操作中的若干问题与解决策略 ;一、试剂贮存1、裂解液 4℃贮存,避免反复冻融,否则影响裂解效果,造成假阴性。2、反应液 -20℃贮存。试剂开封后,4℃保存在1-2周内用完。反应液反复冻融5次影响不大,但过多的冻融会降低扩增效率。;3、Taq酶 -20℃贮存(存于有霜冰箱)。4、阳性模板 -20℃贮存,可反复冻融5次左右。阳性模板4℃也可贮存2周左右。;二、标本处理1、尿道、阴道、宫颈分泌物 棉拭子经生理盐水洗涤后,2000r/min后取上清500ul。过多的沉淀物裂解后,会导致PCR抑制而产生假阴性结果,或出现电泳背景模糊和拖尾现象。尤其是脓性分泌物,沉淀物过多,易造成假阴性。;2、尿液 男性尿道炎患者,若无分泌物,可用初段尿