小反刍兽疫病毒犘蛋白的表达纯化及抗体的制备及-畜牧兽医学报.PDFVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１０４１８ ９９５１０００ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 小反刍兽疫病毒 蛋白的表达、纯化及 犘 抗体的制备及初步应用 翟军军，窦永喜，张海瑞，毛 立，蒙学莲，王秋霞，骆学农，才学鹏 　 （中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 ７３００４６） 摘 要：本文旨在对小反刍兽疫病毒 蛋白进行原核表达，并利用表达的蛋白制备抗血清，然后用于间接免疫荧 Ｐ 　 光检测。将构建好的 （ ） 重组表达质粒转化大肠杆菌构建 蛋白的原核表达体系。重组菌经 ｐＥＴ３０ａ＋ Ｐ Ｐ ＩＰＴＧ 诱导，用 电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化，确定了 蛋白在 、 诱导 ＳＤＳＰＡＧＥ Ｐ ２８℃ ＩＰＴＧ 浓度为 · －１的条件下诱导 ，可溶性 蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的 蛋 ０．２ｍｍｏｌ Ｌ ６ｈ Ｐ Ｐ μ 白，然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠，制备了多克隆抗体，其滴度最高可达 １∶２５６００，而且特异性好，表明获得 了 蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对 ／ 真核表达进行了间接免疫荧光检测。 蛋白在 Ｐ ｐｃＤＮＡ３．１Ｐ Ｐ 大肠杆菌中得到了高效表达，并制备了特异性好、滴度高的抗血清，为研究 蛋白功能奠定了基础。 Ｐ 关键词： ； 蛋白；表达；纯化；抗体制备；应用 ＰＰＲＶ Ｐ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５９．５ Ａ ０３６６６９６４２０１００８０９９５０６ 　　　　 　　　　 ， 犈狓狉犲狊狊犻狅狀犘狌狉犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犘狅犾犮犾狅狀犪犾犃狀狋犻犫狅犱 犘狉犲犪狉犪狋犻狅狀犪狀犱犘狉犲犾犻犿犻狀犪狉 狆 狔 狔 狆 狔 犃 犾犻犮犪狋犻狅狀狅犳犘犺狅狊犺狅狉狅狋犲犻狀狅犳犘犲狊狋犲犱犲狊犘犲狋犻狋狊犚狌犿犻狀犪狀狋狊犞犻狉狌狊 狆狆 狆 狆 ， ， ， ， ， ＺＨＡＩＪｕｎｕｎ ＤＯＵＹｏｎｘｉＺＨＡＮＧＨａｉｒｕｉＭＡＯＬｉＭＥＮＧＸｕｅｌｉａｎ ｊ ｇ  ， ， Ｗ