四 柠檬酸发酵机制.ppt

第四章 柠檬酸发酵机制 重点：柠檬酸生物合成途径；柠檬酸生物合成的代谢调节 难点：柠檬酸生物合成的代谢调节 第一节 柠檬酸合成途径 柠檬酸又名枸橼酸，学名α-羟基丙烷三羧酸，是生物体主要代谢产物之一。主要用途：食品、饮料、医药、化妆品、洗涤剂、建材等领域。/cn/cpjs_2.asp 最早的柠檬酸是从柠檬中提取的，故命名为柠檬酸。后来采用发酵法生产。世界上最早的发酵法柠檬酸生产是1923年的比利时。 1952年，美国的Miles 公司以淀粉质为原料，经水解后，深层发酵获得成功。我国1953年刚开始也是采用浅盘法发酵生产柠檬酸，60年代后期，开始采用液体深层发酵法生产柠檬酸。 目前，我国柠檬酸行业从产量上位居世界第一，从技术上，在国际上也是处于世界领先水平，并远远领先于其他国家，其优势在于： 1.我国的柠檬酸发酵采用的菌种（黑曲霉）具有双重功能，当淀粉原料被液化后，即可进行发酵，不需要将淀粉水解成葡萄糖，简化了生产工艺，降低了生产成本。 2.尽管采用边糖化边发酵的工艺，但发酵周期只有64小时，生产周期比国外的单边发酵周期还要短。 3.柠檬酸的产酸速度大大地高于国外水平。平均产酸速率是国外的2 倍。 柠檬酸合成途径： 丙 乙酰COA 葡萄糖 酮 →柠檬酸 酸 草酰乙酸 由葡萄糖生成柠檬酸的碳平衡： 通过 CO2固定反应提供C4二羧酸 192 / 180 == 106.6% C6H12O6 C6H8O7 (C没有增加) 可见，CO2固定反应堆与柠檬酸发酵的重要性。 在柠檬酸产生菌内，存在下列CO2固定反应： 1）磷酸烯醇式丙酮酸 + CO2 == 草酰乙酸（C4二羧酸） 酶：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 2）丙酮酸 + CO2 === 草酰乙酸（C4二羧酸） 酶：丙酮酸羧化酶 以上两种CO2固定反应所需要的辅酶都是生物素。 由葡萄糖生成柠檬酸的能量平衡： 1）能量产生：一个葡萄糖生成一分子柠檬酸过程中，EMP途径中产生4个ATP；氧化磷酸化产生9个ATP 2）能量消耗：一个葡萄糖生成一分子柠檬酸过程中，EMP途径中消耗2个ATP；丙酮酸梭化消耗1个ATP 结论：一个葡萄糖生成一分子柠檬酸过程中，理论上可产生10个ATP 第二节 柠檬酸生物合成的代谢调节 柠檬酸是重要的代谢调节因子,正常细胞中柠檬酸不积累，但黑曲霉可积累。 一、糖酵解及丙酮酸代谢的调节 1.在正常情况下，柠檬酸、ATP对磷酸果糖激酶（PFK）有抑制作用，而AMP、无机磷、 NH4+对该酶则有激活作用，特别是NH4+还能解除柠檬酸、ATP对磷酸果糖激酶的抑制作用。 微生物体内的NH4+，可以解除柠檬酸对PFK的这种反馈抑制作用，在较高的NH4+的浓度下，细胞可以大量形成柠檬酸，那么NH4+ 浓度是如何升高的呢？ 2.进一步的研究表明，柠檬酸产生菌——黑曲霉如果生长在Mn+ 缺乏的培养基中，NH4+浓度异常的高，可达到25mmol/L，显然，由于Mn+的缺乏，使得微生物体内NH4+浓度升高，进而解除了柠檬酸对PFK活性的抑制作用，使得葡萄糖源源不断的合成大量的柠檬酸。 Mn+ 缺乏如何会使NH4+浓度升高呢？ 当培养基中Mn+ 缺乏时，同时微生物体内积累几种氨基酸（GA、GLu、Arg、Oin等），这些氨基酸的积累，意味着体内蛋白质的合成受阻，而外源蛋白质的分解速度则不受到影响，这样NH4+的消耗下降，NH4+浓度就会升高。 氨基酸 蛋白质 氨基酸 氨基化合成氨基酸 3.丙酮酸激酶是EMP途径的第2个调节点，在某些真菌得到证实，但黑曲霉未被证实。 二、TCA循环的调节： 1.TCA环的起始酶： 柠檬酸合成酶是一种调节酶。但在黑曲霉中，柠檬酸合成酶没有调节作用，这是黑曲霉TCA环的第一个特点。 2.顺乌头酸酶活性的控制: 该酶的丧失或失活是阻断TCA循环大量生成柠檬酸的必要条件。通常柠檬酸产生菌体内该酶的活性本身就要求很弱，但在发酵过程中仍需要控制它的活性。由于该酶的活性受到Fe2+ 的影响，控制培养基中的Fe2+ 的浓度，可以使该酶失活。 3.第二个特点：黑曲霉菌体内α-酮戊二酸脱氢酶缺失或活力很低（TCA环被阻断），被葡萄糖和NH4+ 抑制。 4.氧和pH值对柠檬酸发酵的影响很大。 在柠檬酸发酵过程中，存在三个控制要点：