[理学]武汉大学第五版 仪器分析 分子发光课件.ppt

8.1 概 论 8.1.1 分子发光的类型 1.分子发光—分子吸收外来能量时,分子的外层电子可能被激发而跃迁到更高的电子能级,这种处于激发态的分子是不稳定的,它将经多种衰变途径而跃迁回基态. 包括辐射跃迁和非辐射跃迁,在辐射跃迁中伴随发光现象,称为分子发光. 2.按激发的模式分类: 光致发光—分子通过吸收光能而被激发发光. 化学发光(生物发光)—由化学反应的化学能或由生物体释放出来的能量所激发而发光. 3.按分子的激发态类型分类: 荧光和磷光 8.2 分子荧光与磷光光谱分析法 8.2.1 基本原理 8.2.1.1 荧光、磷光产生机理 1.荧光、磷光的产生 2. 荧光、磷光的寿命和量子产率 荧光量子产率（?） 8.2.1.2 荧光\磷光与分子结构的关系 8.2.1.5激发光谱与发射(荧光或磷光)光谱 excitation spectrum and fluore-scence spectrum 镜像规则的解释 8.2.2 荧光、磷光仪器 仪器光路图 同步扫描技术 可获得三维光谱图的仪器 8.2.2.2 磷光分析仪器 8.2.4 磷光的测定方法 与荧光相比，磷光具有两个特点： （1）磷光辐射的波长比荧光长 （2）磷光的寿命比荧光长 8.2.4.1 低温磷光分析 随着温度的降低，磷光逐渐增强 8.2.5 荧光分析法的应用 8.2.6磷光分析法的应用 8.3.1 概论 8.3.2基本原理 principle 8.3.4 化学发光的测量仪器 2. 磷光强度与磷光物质浓度的关系 当磷光物质浓度很小时，磷光强度Ip与磷光物质浓度c之间的关系式为: Ip=2.3φpI0εbc 式中：φp为磷光效率，I0为激发光的强度，ε磷光物质的摩尔吸收系数，b为试样池的光程。 在一定条件下，φp、I0、ε、b均为常数，所以上式可写成： Ip=Kc 即磷光强度与磷光物质的浓度c成正比。 3. 内滤光作用和自吸现象 自吸现象：化合物的荧光发射光谱的短波长端与其吸收光谱的长波长端重叠，产生自吸收；如蒽化合物。 内滤光作用：溶液中含有能吸收激发光或荧光物质发射的荧光，如色胺酸中的重铬酸钾； 200 250 300 350 400 450 500 荧光激发光谱 荧光发射光谱 nm 蒽的激发光谱和荧光光谱 8.2.2.1 荧光分析仪器 测量荧光的仪器主要由四个部分组成： 激发光源、样品池、单色器、检测器 1、光源：氙灯和高压汞灯 2、单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器 3、样品池：石英 4、检测器：光电倍增管 光源 第一 单色器 第二 单色器 激发 荧光 样品池 检测系统 荧光 检测器 ?有两个单色器，光源与检测器呈90度角，以避开激发光、杂散光的干扰，增加检测灵敏度。 I0 If It 紫外－可见 检测器 ? 分光系统(双单色器) 第一单色器作用：选择激发波长 第二单色器作用：分离出荧光发射波长 ?样品池 四面透光 该型仪器可进行荧光、磷光和发光分析； 同步扫描技术可简化光谱，谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率； 如图。 可获得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧(磷)光光谱图 与荧光分析仪器基本相似。 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。在有荧光发射的同时测量磷光。 1、试样室 将试样放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，即可用于低温磷光测定。 2、磷光镜 有些物质同时会发生荧光和磷光，为了能在同时有荧光现象的体系中测定磷光，通常必须在激发光单色器和液槽之间以及在液槽和发射光单色器之间各装一个斩波片，并由一个同步马达带动，这种装置称作磷光镜。 8.2.3 荧光的常规测定方法 1、直接测定法 2、间接测定法 荧光衍生法、荧光淬灭法、敏化荧光法 3、多组分混合物的荧光分析 用液氮作冷却剂（77K） 重原子效应： 使用含有重原子的溶剂或在磷光物质中引入重原子取代基，都可以提高磷光物质的磷光强度，这种效应称作重原子效应。 8.2.4.2室温磷光 由于低温磷光需要低温实验装置、溶剂选择的限制，发展了以下几种室温磷光法： 1、固体表面室温磷光法 此法测量室温下吸附于固体基质（载体）上的有机化合物所发射