[理学]浙江大学生物无机化学课件Chapter 4.ppt

第4章 金属离子与生物大分子的结合与作用 Chapter 4 The Binding and Acting in Between Metal Species and Bio-macromolecule 金属-核酸相互作用 现代生物学的研究表明：核酸在结构、功能、甚至生物催化上都具有重要作用。 环境中出现的重金属毒性部分源于重金属离子与核酸间的共价结构作用； 重金属会干涉金属蛋白的正常调节功能，从而干涉基因的正常表达； 通过了解天然金属调节蛋白在基因表达中的功能，设计出新的能与重金属特异性结合的配体，它们能像蛋白质那样捕获这些有害的重金属离子，从而阻止它们发挥作用。 重金属－核酸相互作用的研究也是成功开发顺铂类抗癌药物的基础。 金属配合物与DNA发生共价或非共价结合的作用模式 为共价结合的代表，示出与DNA碱基配位的例子。 cis-(二氨)合铂与鸟嘌呤N7位氮原子的共价结合； 通过戊糖环上羟基形成锇酸酯键； Mg(H2O)62+与磷酸根形成的静电缔合作用。 金属配合物与DNA发生共价或非共价结合的作用模式 (b) 金属配合物的非共价性插入堆积作用 下图示出(三联吡啶)(2-羟基乙硫醇基)铂在二核苷酸d(CpG)碱基对上、下及中间的插入堆积作用的晶体结构。 金属配合物与DNA发生共价或非共价结合的作用模式 (c)与配合物形成了氢键 右图示出的Z型的d(CG)3与Co(NH3)63+鸟嘌呤碱基及磷酸骨架(P9)形成氢键的晶体结构的部分示意图。 1、配位作用 金属与DNA间最常见的共价配合物是由软金属离子与碱基上亲核位点的配位作用而形成的。 例如：在cis-(NH3)2Pt-dGpG结构中，铂中心与鸟嘌呤碱基的N7位发生配位。 从与整个聚核苷酸相互作用的层次上看，似乎仍有两个配位点可供利用的顺二氨铂中心会在一股上相邻的鸟苷酸之间形成内交联(intranstrand crosslinking)。 其他会与软金属配位的碱基亲核位点还有： 腺嘌呤的N7位和N1位； 胞嘧啶的N3位； 胸腺嘧啶和尿嘧啶的N3位。 1、配位作用 硬度较高些的过渡金属离子还具有与磷酸根配位结合的能力。 这些配合物呈现离子性而非共价性的特征。 考察各种不同金属离子存在下双螺旋DNA的熔化温度(Tm)，发现Tm与金属离子的浓度有关。 Eichhorm等总结出金属离子与碱基或磷酸根相结合的优先选择规律，发现对磷酸根比对碱基优先选择的顺序如下： Mg(II)Co(II)Ni(II)Mn(II)Zn(II)Cd(II)Cu(II) 这个顺序排列由DNA双螺旋熔化温度实验得出，一般来说，碱基结合作用会使双螺旋形式去稳定，而与磷酸根的配位作用或中和作用会增加螺旋的稳定性，从而使Tm升高。 双螺旋DNA的熔化温度(Tm) 在一定理化因素作用下，核酸双螺旋等空间结构中碱基之间的氢键断裂，变成单链的现象称为变性（denaturation）。 引起核酸变性的常见理化因素有加热、酸、碱、尿素和甲酰胺等。在变性过程中，核酸的空间构象被破坏，理化性质发生改变。 由于双螺旋分子内部的碱基暴露，其A260值会大大增加。A260值的增加与解链程度有一定比例关系，这种关系称为增色效应（hyperchromic effect）。 如果缓慢加热DNA溶液，并在不同温度测定其A260值，可得到 “S”形DNA熔化曲线（melting curve）。从DNA熔化曲线可见DNA变性作用是在一个相当窄的温度内完成的。 双螺旋DNA的熔化温度(Tm) 当A260值开始上升前DNA是双螺旋结构，在上升区域分子中的部分碱基对开始断裂，其数值随温度的升高而增加。 在上部平坦的初始部分尚有少量碱基对使两条链还结合在一起，这种状态一直维持到临界温度，此时DNA分子最后一个碱基对断开，两条互补链彻底分离。 通常把加热变性时DNA溶液A260升高达到最大值一半时的温度称为该DNA的熔解温度（melting temperature Tm）。 Tm是研究核酸变性很有用的参数。 Tm一般在85～95℃之间，Tm值与DNA分子中G 和C含量成正比。 1、配位作用 金属离子与糖环部分的共价作用较少见到但十分有趣。虽然戊糖环通常不和金属离子发生配位，但却能相当容易地通过戊糖环中的C2’-C3’形成锇酸酯。 有人提出这一特殊的反应可以作为RNA重金属染色法的基础。 事实上，OsO4的应用并不局限于同糖环的反应，也能与DNA上易接近嘧啶环的C5-C6富电子双键间相互作用，生成顺式锇酸酯。 2、插入作用与氢键作用 金属配合物与聚核苷酸的相互作用并不只局限在金属中心与聚合物直接配位，还存在着大量选择性很高、较弱的非共价作用。 一般出现在已经配位饱和的金属配合物与核酸之