有抑制剂的酶催化反应动力学.ppt

Basis for Enzyme engineering What we will cover 一、酶的化学本质及组成和结构特点 二、酶作为催化剂的显著特点 三、酶的分类和命名（重点） 四、酶催化作用机制（重点） 五、酶动力学及酶抑制剂（难点） 五、酶催化反应动力学 简单酶催化反应动力学； 酶动力学图解 六、有抑制剂的酶催化反应动力学 简单的酶催化反应动力学 简单的酶催化反应动力学是指由一种反应物(底物)参与的不可逆反应。属于此类反应的有酶催化的水解反应和异构化反应。这种简单的单底物酶反应动力学，是酶反应动力学的基础。 G．E．Briggs和J．B．Haldane对上述第三点假设进行修正，提出了“拟稳态”假设。 认为由于反应体系中底物浓度要比酶的浓度高得多，中间复合物分解时所得到的酶又立即与底物相结合，从而使反应体系中复合物的浓度维持不变，即中间复合物的浓度不再随时间而变化。 km与ks的关系为 由两种推导方法所得速率方程式形式基本相同，不同的是ks值代表反应的平衡常数，而km值称为米氏常数，它代表动态的平衡常数， 恒态时的浓率关系。 当 时，km值才接近于ks km值是酶的一个很基本的特性常数，它和酶的浓度无关，但和温度、pH等因素有关。 根据km值可以推断酶和底物的亲和力。如果酶的专一性不高，可催化几种底物发生反应时，km值最小的就表示酶与这一底物的亲和力最大，反之，则最小。 根据km值，可以估计胞内基质浓度，如 那么只要稍微改变基质浓度[S]，Km的变化就很大，即反应速率对基质浓度改变的敏感性很大，如果 或 时，基质浓度相差1000倍，但反应速率只增加一倍，即在生理上保持 是没有意义的。 一般来说，作为酶的天然底物，在体内的浓度水平应该接近于它的Km值。 从rs~[S]图的关系曲线可以看出，该曲线表示了三个不同的动力学特点的区域。 当 ，即底物浓度比km值小很多时，该曲线近似为一条直线，这表示反应速率与底物浓度近似正比关系，此时酶催化反应可近似看作一级反应。 式中 为总反应的一级反应常数。 这是因为当km值很大时，大部分酶为游离态的酶，而[ES]的量很少。若要提高反应速率，只有通过提高[S]值，进而提高[ES]，才能使反应速率加快。因而此时的反应速率主要取决于底物浓度的变化。 k值可以表示瞬时时间内基质转化为产物的份数，或在瞬时时间内有多少份数的基质转化为产物。 当 时，该曲线近似为一水平线，表示当底物浓度继续增加时，反应速率变化不大。此时，酶催化反应可视为零级反应，反应速率将不随底物浓度的变化而变化。这是因为当km值很小时，绝大多数酶呈复合物状态，反应体系内游离的酶很少。所以即使提高底物浓度，也不能提高其反应速率。 ∴ 当[S]与km的数量关系处于上述两者之间的范围时，则符合M-M方程所表示的关系式。 酶动力学图解法 要建立一个完整的动力学方程，必须通过动力学实验确定其动力学参数。对Michaelis-Menten方程，就是要确定rmax和km值。但直接应用Michaelis-Menten方程求取动力学参数所遇到的主要困难在于该方程为非线性方程。为此常将该方程加以线性化，通过作图法直接求取动力学参数。 1. 双倒数图解法（Lineweaver Burk图解） 将M-M方程取其倒数得到下式: 以 值对应于 作图： 双倒数法应用广泛，但有两个缺点： 1、选用基质浓度不宜等量增加，否则在作图时，点都会集中在纵轴附近，难于正确作图。基质浓度以选用1.0、1.11、1.25、1.43、1.67、2.0、2.5、3.33，5和10等为宜，这样倒数值几乎是等量递增的。 2、反应速率测定稍有误差，其倒数值误差必将扩大，特别是在低浓度基质测定时，引起的误差更大，这样将影响直线斜率，影响 rmax及Km值 的测定。 2. 图解法（Hanes Woolf图解） 将M-M方程变换成下式: 以 为纵坐标， 为横坐标