微生物工程试验东北大学生命科学与健康学院.doc

微生物工程及设备 实验指导 （修订版） 舒 杨 耿 莉 编写 东北大学理学院生物技术研究所 二零零九年四月 前 言本实验教材是为了配合理论课微生物工程生物工程的学习而专门编写的，供生物工程专业学生使用……………………………………………………… 1 实验二 接种技术、接种物的制备和种子扩大培养……………………… 8 实验三 菌种保藏…………………………………………………………… 24 实验四 麦白霉素产生菌的诱变育种……………………………………… 32 实验五 原生质体制备和再生……………………………………………… 38 实验六 抗生素生物效价的测定…………………………………………… 45 实验七 四环素发酵工艺…………………………………………………… 56 实验八 培养基成分对麦白霉素组分的影响……………………………… 69 实验九 5L发酵罐中试实验及发酵产物的高效液相色谱检测………… 77 实验十 15L发酵罐中试实验及酸奶的制备……………………………… 86 实验十一 链霉菌质粒DNA、染色体DNA的提取………………………… 98 实验十二 接合转移及双交换菌株的筛选………………………………… 102 实验十三 旋转蒸发设备的使用…………………………………………… 109 实验十四 冷冻干燥设备…………………………………………… 112 附录一 实验试剂的配制…………………………………………………… 114 附录二 总糖含量表………………………………………………………… 119 主要参考文献 ……………………………………………………………… 120 实验一 培养基的配制 一、目的要求 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。 二、实验原理 培养基是提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的按一定比例配制的多种营养物的混合物。培养基各组分应该保藏在阴凉、干燥、清洁的环境里。任何灭菌方法的效果取决于培养基初始污染水平。如果保藏条件适合微生物的生长，，，， 配制培养基时保持一个干净、整洁的环境十分重要。如果配制培养基的地点靠近发酵车间，，，， 灭菌的效果在很大程度上取决于培养基的初始污染水平，，(这会为灭菌时的微生物提供保护场所)。严格的清洁操作可使发酵不会因为污染而失效， 配制培养基时可以制订一个各个组分加入顺序的标准方法，，，，，(NH4)2S04和石灰混合会生成氨气及造成pH的改变等，，，， 如果培养基使用的成分中有在自然条件下极易染菌的物质(如糖蜜)，1-2h，，，， 中试规模的发酵罐进行原位灭菌时通常可以进行搅拌操作，但是大部分实验仪器都是在高压蒸汽灭菌器中进行灭菌的，，，， 将培养基成分分别灭菌的优点在于可以避免降解反应和热不稳定生长因子的损失。但是这样会增加所需要的无菌容器的数量以及连接容器之间的无菌管路，， 培养基成分本身会有一些变化，(如糖蜜)， 三、实验材料 牛肉膏 蛋白胨 琼脂 可溶性淀粉 葡萄糖 孟加拉红 链霉素 1mol·L-1 NaOH lmol·L-1 HCl KNO3 NaCl K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O （二）材料 试管 三角瓶 烧杯 量筒 玻璃棒 天平 牛角匙 pH试纸 棉花 牛皮纸 记号笔 棒绳 纱布 漏斗 漏斗架 胶管 四、实验一 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下： 牛肉膏 3g， 蛋白胨 10g， NaCl 5g， 琼脂 15-20g， 水 1000mL，pH 7.0-7.2 1、称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与