[高中教育]酶切原理.pptVIP

五、注意事项——DNA凝胶电泳 六、限制性内切酶酶切常见问题分析 六、限制性内切酶酶切常见问题分析 六、限制性内切酶酶切常见问题分析 五、限制性内切酶酶切常见问题分析 五、限制性内切酶酶切常见问题分析 五、限制性内切酶酶切常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 DNA上结合有蛋白质 内切酶中含有DNA外切酶 减少酶用量或消化时间，换用新包装的酶 减少酶用量或消化时间，换用新包装的酶 问题六：电泳后DNA片段的带型弥散，不均一 原因 对 策 含磷酸盐的浓度高 内切酶失活不全或含有ATP酶 平末端连接 外切酶污染 连接缓冲液不合适 透析，乙醇沉淀去除磷酸盐 延长灭活时间或用酚抽提，乙醇沉淀回收DNA 加大T4 DNA Ligase用量 减少酶用量，缩短保温时间，酚抽提回收DNA 重新配制连接缓冲液 问题七：酶切后的DNA片段连接效率低 原因 对 策 DNA降解 电泳缓冲液陈旧 所用电泳条件不合适 DNA上样量过多 DNA样含盐过高 有蛋白污染 DNA变性 避免核酸酶污染 电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液 电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DN