[高等教育]110基础生物化学实验中科大实验四 重组蛋白的SDS-PAGE.pptVIP

1 样品浓缩效应 (1)凝胶孔径不连续性 (2)缓冲体系离子成分及pH值的不连续性 (3)电位梯度的不连续性 (2)缓冲体系离子成分及pH值的不连续性: Tris:缓冲配对离子，维持溶液的电中性及pH值 Cl-:在电场中迁移率快，前导离子(leading ion) ，快离子。 Gly:其pI =6.0，在pH6.7的浓缩胶缓冲体系中，甘氨酸解离度很小，因而在电场中迁移很慢，称为尾随离子（trailing ion），慢离子。 当进入pH8.9的分离胶时，甘氨酸解离度增加，其有效迁移率超过蛋白质;因此Cl-及NH2CH2COO-沿着离子界面继续前进。蛋白质分子由于分子量大，被留在后面,然后再分成多个区带. 大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷，在电场中，都向正极移动。 (3)电位梯度的不连续性 V(电泳速度)=E(电位梯度) * m(迁移率) E高m慢≈E低m快 由于蛋白质的有效迁移率恰好介于快、慢离子之间，因此也就聚集在这个移动的界面附近，被浓缩形成一个狭小的中间层。 2 分子筛效应 分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。 分子量小且为球形的蛋白质分子所受阻力小，移动快，走在前面;反之，则阻力大，移动慢，走在后面。 分子筛效应不同于柱层析中的分子筛效应，后者是大分子先从凝胶颗