[高等教育]第十章基因文库的构建.pptVIP

基因组文库与 cDNA文库的比较： 基因组文库包含基因组的所有基因 cDNA文库只包括某一特定细胞类型、某一组织、或某一发育时期的表达序列 分离特定基因，cDNA库比较方便 研究调控序列，必须基因组文库 扣除杂交技术 SSH的原理与基本过程 DDRT-PCR 的发明及其基础 由Liang于1992年创立 是分离差异表达基因强有力的工具 在随后几年里， Liang等在技术方面做了大量改进，使技术更适用、更简便 基于RT-PCR理论，依赖于3种技术 1）RT-PCR技术 2）以特定引物进行的PCR技术 3）DNA电泳技术 DD的原理 DD的优点 以RT-PCR和DNA凝胶电泳为基础 灵敏度高，仅需0.2μg的总RNA 可以同时比较多个样品间基因表达的差异 可以同时检测到“上调”及“下调”的基因 时间短，实验过程中可步步验证比较 可进行多基因家族的表达分析 DD的缺点 假阳性高 样品mRNA可能有部分降解 有少量的DNA污染 单条带可能由一种以上cDNA 片段所构成 有些特异cDNA片段太短,在Northern杂交时检测不到杂交信号 PCR扩增了一些稀有mRNA片段,在杂交时显示不出差异表达的信号 绝大多数差异条带仅含有3’-UTR 500bp以内的一短片段的信息，这些区域的序列结构相对保守，得不到特异的基因 对低丰度mRNA检出率低 ESTs