五年制融合实验遗传学部分.docVIP

凋亡细胞的诱导及检测 一、实验目的 掌握培养细胞诱导凋亡的方法 掌握凋亡细胞形态特征检测方法 掌握基因组DNA特征及凋亡相关蛋白的检测方法 熟悉PCR原理及技术 熟悉凋亡相关知识、科研的基本思路 二、实验内容 1、培养细胞凋亡的诱导、凋亡细胞形态学、细胞增殖活力检查 2、凋亡细胞的DNA ladder、caspase3活性检测 3、培养细胞RNA的提取及定量、逆转录PCR 4、PCR法扩增凋亡相关基因Bcl-2和Bax、琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 三、实验步骤与操作 第一天（8学时） 理论知识讲解：凋亡诱导方法及诱导药物剂量计算（细胞加药后诱导期间讲解） 实验内容及安排： 1、培养细胞的凋亡诱导（实验教材p137，p144）约需2h 2、倒置相差显微镜下观察凋亡细胞的形态变化（实验教材p145） 3、培养细胞的Giemsa染色、吖啶橙荧光染色、碘化丙啶（PI）/Ho.33342荧光双染检测（实验教材p146-148） 4、MTT法检测细胞内琥珀酸脱氢酶活性及细胞存活率计算方法（实验教材p137） 操作步骤： 1） 凋亡诱导：用25ml培养瓶体外培养人肿瘤细胞株（BEL-7402细胞或HepG2），2～3d传一代。 a) 实验前一天将细胞以2ⅹ104/ml接种于预先放入盖玻片的24孔板中。在试验前2～4 h加入凋亡诱导剂大蒜素（60 mg/L），37℃、5%CO2、饱和湿度条