人核受体Nurr1基因的克隆和表达及产物纯化.pdfVIP

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2018-03-23 发布于陕西
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人核受体Nurr1基因的克隆和表达及产物纯化.pdf

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维普资讯 ISSN 1007—7626 中国生物化学与分子生物学报 2004年 10月 ar Biol 20(5)：578～582 CN 11-3870／Q ChineseJournalofBiochemistryandMolecu1 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． —． — M olecularCloning，ExpressionandPurification ofHumanNuclearReceptorNurrl LAIYan．1ai，SUN Zhao．hui，LIpeng，XIEZuo-ping (LaboratoryofNeurobiology，DepartmentofBiologicalSciencesandBiotechnology，TsinghuaUniversity，Beijing100084，China) Abstract In ordertoobtainNurrlprotein forfurtherligandscreening，protein-protein interactionstudying nadproteinstructureanalyzing，thefull-lengthfragmentofthehumanNurrlcodingregionfrom humanfetal mi dbraintissue wasamplified by RT-PCR．Confirmed by auto-sequencing， the targetgene fragmentwas subclonedintoexpressionvectorpET28aandtransfomredintoE．coliBL21(DE3)．Withtheinductionof IPTG．anew recombinnatproteinwitharelativemolecularmassof70kD appearedastheexpectedsizena d mainly existed in the soluble fomr ．A 45 kD portion oftruncated Nurrl protein was alSO expressed unexpectedly．andwaslocatedin inclusionbodies．Meanwhile，a”S．1abeledrecomb inantNurrlproteinwas alSOproducedusingthecoupled nvitrotranscriptionandtranslationsystem inrabbitreticulocytelysateswith pET28． rr1astemplate．Theseexpressed6 ×His．Nurrlfusionproteinswereanalyzed byimmunoblotwith anti-Nurrlpolyclonal antibody or autoradiography，and purified by Ni-NTA affinity chromatography． In addition．onevarinatcDNA cloneof rr1wasobtainedfrom RT．PCRprod