β葡萄糖醛酸苷酶活性影响因素的探讨.pdfVIP

4 山东畜牧兽医 13一葡萄糖醛酸苷酶活性影响因素的探讨 杨 光 (山东农业大学动物科技学院泰安271018) 李振清 (滨州职业学院生物工程系兽医教研室) 李建基 (扬州大学畜牧兽医学院) 摘要探讨实验室条件下人工培植牛黄过程 1．3仪器 中，温度、pH值、钙、乙二醇等因素对8．葡萄糖醛酸 721—100型分光光度计(AZ海第三分析仪器厂 苷酶活性的影响，结果表明，温度升高可显著提高 产)、SY21一Ni型电热恒温水浴锅(北京长风仪器 该酶的活性(P0．01)，且在55℃时，其活性比在仪表公司产)、1702型电子分析天平(德国产)、7DL 37℃提高近4．1倍；该酶的最适pH值为7．0；Ca2+一40B型台式离心机(上海安亨科学仪器厂产)、 在0．5～10 mMol／L浓度范围内对该酶具有激活JY99—2D型超声波细胞破碎机(宁波新芝生物科 作用且与浓度成正比，在10mMol／L时其激活作 技股份有限公司产)。 用最大；乙二醇在0．3～3Mol／L的浓度范围内对1．4样品处理 该酶具有激活作用，其最适浓度为1．5Mol／L。 将5种血清型大肠杆菌菌种依次接种于10％、 关键词 大肠杆菌 p葡萄糖醛酸苷酶 温 20％、30％、40％、50％、60％的自制胆汁琼脂培养 度pH值钙乙二醇 基中进行耐胆汁驯化培养，再经营养肉汤培养基增 在人工培植牛黄的研究中，如何提高培植牛黄 min，然后经 菌培养后用超声波细胞破碎机处理15 3000 的产量和质量成为研究的热点。牛黄中胆红素和胆 rpm离心5min后，将上所得上清液置于5 酸含量是评价牛黄质量优劣的标准，因此促进胆汁 支试管内保存于一4℃冰箱中，作为酶源进行酶活 中结合胆红素的水解和游离胆红素钙的沉淀是提 性测定。 高牛黄质量的关键。埃希氏大肠杆菌可以产生lB一葡 1．5酶活性测定 萄糖醛苷酶(B—G酶)，可作为牛黄菌种，其酶活性 酚酞葡萄糖醛酸在8一G作用下分解为酚酞和 的高低对牛黄产量和质量有重大影响。目前国内在 葡萄糖醛酸，酚酞在碱性溶液中显红色，且红色的 牛黄菌种的筛选、驯化等方面报道较多，但在如何 深浅与酚酞的量成正比。通过比色法由标准曲线得 提高p—G的活性这一方面还鲜有研究。为了探讨促 出酚酞含量，然后按下式计算酶的活性单位。 进B—G活性的因素，为提高培植牛黄的产量和质量 紫X1000X掣×南=国际警位 提供科学依据，特进行该项试验。 l材料方法 pG活性用每分钟、每升检测样品水解底物释 1，1 牛黄菌种 放出10叫tool的酚酞为一个国际单位。具体操作步 采用5种血清型的大肠杆菌，编号为I、Ⅱ、 骤见表1。 Ⅲ、I＼『、V，其中I、Ⅱ组为本院预防兽医学系微生 1．6 不同温度条件下酶活性变化的试验 物教研室提供；Ⅲ、Ⅳ、V组为本课题组保存菌种。 在37℃、40℃、55。C3个温度条件下，用上述方 1．2 试剂 法分别测定样品的酶活性，观察不同温度条件下酶 活性的变化，从而确定最适反应温度。 beta—GLUCOSIDASE：Worthington，批号， 1．7 不同pH值的系列缓冲剂中酶活性变化的试 J1K697J；pHenolpHthaleinmono—p—glucosiduronic