试验五离子交换层析法分离氨基酸.PDFVIP

实验五 离子交换层析法分离氨基酸 实验目的 学习用阳离子交换树脂分离氨基酸 的操作方法和基本原理 层析技术 1903年，俄国科学家M.C.Jber首创了一种从绿 叶中分离多种不同颜色色素成分的方法，他将 植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子，各 种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而 被分开，由此得名为色谱法 (Chromatography)，又被称为层析法。 层析法不断发展，形式多种多样。 1944年出现 纸层析以后，层析法不断发展，相继出现薄层层 析、亲和层析、凝胶层析、气相层析、高压液相 层析（HPLC）等。 几乎每一种层析法都已发展成为一门独立的生 化高技术，在生化领域内得到了广泛的应用。 层析系统都由两个相组成： 固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固 体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也 可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶 液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的 吸附，溶解，交换等作用。 流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的 物质朝着一个方向移动的液体、气体等，都称为 流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时 称为展层剂。 层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如 吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数 等），使各组分在两相中的分布程度不同，从而使各组 分以不同的速度移动而达到分离的目的。 按操作形式不同分类： 柱层析：将固定相装于柱内，使样品沿一个方向 移动而达到分离。 纸层析：用滤纸做液体的载体，点样后，用流动 相展开，以达到分离鉴定的目的。 薄层层析：将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸 层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。 纸层析和薄层层析主要适用于小分子物质的快速检测 分析和少量分离制备，通常为一次性使用，而柱层析 是常用的层析形式，适用于样品分析、分离。生物化 学中常用的凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、高 效液相色谱等都通常采用柱层析形式。 按层析过程的机理分类： 名称 操作方式 固定相 流动相 分离依据 纸层析 分配层析 液体 液体 溶解度 薄层层析 带电性 离子交换层析 离子交换柱层析 固体 液体 静电引力 吸附薄层层析 固体 液体 吸附层析 吸附力 气体吸附层析 固体 气体 酶与底物 亲合层析 固体 液体 配体专一性 抗原与抗体 凝胶层析 凝胶过滤 固体 液体 分子大小 将作为固相成分的 不溶性基质，例如葡 聚糖凝胶、纤维素、 树脂等填充到柱子 中，用平衡液平衡。 然后加样品，再用 适当的溶剂洗脱。 样品中各种成分通 过柱子取决于与固相 成分的相互作用，最 后以不同速率被洗脱 出来，达到将各个成 分分离的目的。 离子交换层析法 离子交换层析技术主要用于分离氨基酸、 多肽及蛋白质以及核酸、核苷酸及其它带 电荷的生物分子。 离子交换层析以离子交换剂作固定相，利 用它与流动相中需要分离的各种离子的亲 和力不同而