3.转化子的筛选.pptVIP

免疫化学检测法 对所有的转化细胞进行培养，把一张硝酸纤维膜均匀地压在含有许多单个菌落的培养皿表面，用碱处理膜，使细胞裂解，表达产物蛋白质将释放出来，加入带放射性的某一特定基因编码的蛋白质的抗体可与表达产物蛋白质结合，自显影即可检出。 转化子的筛选 ——菌落PCR DNA克隆的过程 获得目的DNA片断 (提取质粒DNA、PCR、酶切） 载体DNA与目的基因连接 转化受体细胞 筛选转化子 表达目的基因 连接反应后，可形成多种类型的DNA分子1.不带外源DNA的载体自连分子2.外源DNA彼此相连的多聚DNA分子3.载体与外源DNA相连的分子 通过筛选鉴定： 1.有没有外源DNA 2.外源DNA的连接方式是否正确 重组子筛选方法 遗传检测法 物理检测法 菌落原位杂交法 免疫化学检测法 测序 菌落PCR 遗传检测法 （1）抗药性记号插入失活选择法 （2） β-半乳糖苷酶显色法筛选重组子----α-互补作用 利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒pUC118质粒的多克隆位点整合在lacZ基因中，该位点如果没有插入外源目的基因，l