环境因素对微生物生长的影响设计实验论文.docVIP

物理因素对大肠杆菌生长的影响 姓名： 班级： 学号： 摘要：大肠杆菌分布在自然界，大多数是不致病的，主要附生在人或动物的肠道里，为正常菌群，少数的大肠杆菌具有毒性，可引起疾病。影响大肠杆菌生长的环境因素有物理因素、化学因素和生物因素。当环境因素发生改变，一定限度内，可引起大肠杆菌形态、生长等特征的改变。当它的变化超过一定的极限时，会导致大肠杆菌的死亡。本次实验为自主设计实验，我们小组主要研究的是温度、紫外线、pH这三个物理因素对大肠杆菌生长的影响。通过将菌种接种在不同PH值的培养基上进行培养，不同时间的紫外线照射后进行培养以及在不同的温度下进行培养，观察大肠杆菌的生长状况[1]。 关键词：大肠杆菌；温度；紫外线；PH值 正文： 环境因素对大肠杆菌的影响 温度通过影响蛋白质、核酸等生物大分子的结构与功能以及细胞结构入细胞膜的流动性及完整性来影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢。微生物群体生长、繁殖最快的温度为其最适生长温度；紫外线破坏及改变微生物的DNA（脱氧核糖核酸）结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代；培养基中的 H+ 影响菌体细胞质膜上电荷性质，微生物吸收物质变化，影响代谢，高浓度H+或引起菌体表而蛋白质和核酸水解以及影响酶和活性[2]。 实验材料 2.1 菌种：大肠杆菌 2.2 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 2.3 试剂：蒸馏水、盐酸、氢氧化钠 2.4 仪器及设备：锥形瓶、烧杯、玻璃棒、电炉、电子天平、培养皿、涂布棒、试管、酒精灯、火柴、10ml移液管、洗耳球、微量移液管、微波灭菌机、高压灭菌锅、恒温培养箱、紫外灯、分光光度计 实验方法 3.1 温度对大肠杆菌的影响 (培养基的配置：称取3.5g营养琼脂培养基于100ml蒸馏水中，加热溶解。分装至6支试管内，分装高度以试管高度的1/4为宜，灭菌备用。 (接种：将经过高压蒸汽灭菌的试管进行冷却，然后无菌操作用微量移液器移取0.1ml大肠杆菌菌液（使用前振荡均匀），接种于6支试管中，震荡均匀。 (培养：将接种大肠杆菌的试管分别置于4℃、37℃和42℃条件下的恒温培养箱培养，24h 后观察菌落生长情况。 ④观察：以“-”表示不生长，并以“+”“++”“+++”表示不同生长量来记录结果。 3.2 紫外线对大肠杆菌的影响 (培养基的配置：称取3.5g营养琼脂培养基于锥形瓶中，加入100ml蒸馏水。将其密封后进行高压蒸汽灭菌。 (倒平板：将已经灭菌的营养琼脂培养基倒入无菌培养基中，倒入三个培养皿，水平放置冷却凝固，并且分别标上2min、3min、4min。 (接种：待培养皿冷却、凝固后，用微量移液管移取0.1ml大肠杆菌菌液（使用前震荡均匀）于一个培养皿中，并且用杀菌并冷却后的涂布棒涂布均匀。 ④紫外线处理：紫外灯先预热15min，将需要紫外灯照射的培养皿置于紫外灯下，打开皿盖，分别照射2min、3min、4min，照射完毕后，盖上皿盖。 ⑤培养：将平板倒置在37℃的恒温培养箱中培养24h，然后进行观察并菌落总数的计算、记录结果。 3.3 PH值对大肠杆菌的影响 (培养基的配制：称取1.8g营养肉汤培养基于100ml蒸馏水中，加热溶解。取6支试管，然后用移液管分别移取10ml培养基于每支试管中。用1mol/L氢氧化钠溶液和1mol/L盐酸溶液调节每两支试管的pH至3、7、11，灭菌备用。 (接种：将经过高压蒸汽灭菌的试管进行冷却，然后无菌操作用微量移液器移取0.1ml大肠杆菌菌液（使用前振荡均匀），接种于装有10ml不同pH营养肉汤的试管中（振荡均匀）。 ③培养：将接种大肠杆菌的试管置于37℃恒温摇床中培养24h。 ④测OD值：将上述试管取出，利用分光光度计测定大肠杆菌OD600nm值。测量时用蒸馏水校正，不同pH的大肠杆菌菌液测量前必须摇匀，然后才能倒入比色皿中测定波长为600nm的OD值。(吸光值越大，浓度越大，即大肠杆菌生长越旺） 菌落计数 4.1选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 4.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 4.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 5.实验结果 表1 温度对大肠杆菌生长的影响 温度（℃） 4 37 42 生长状况 - +++ ++ 注：“-”