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高效液相色谱法测水中炔雌醇浓度 资源与环境科学学院 环科102班 丁元君 前言 水体中的炔雌醇（EE2）是环境内分泌干扰物质的一种。环境内分泌干扰物质是指环境中存在的能干扰人类或动物内分泌系统诸环节并导致异常效应的物质。由于目前所发现的干扰动物及人体内分泌系统的有机化合物绝大多数都具有雌激素特征, 因此通常又将内 分泌干扰化合物称为环境雌激素。[1] 由于人工合成的雌激素具有和内源性激素相似的生物效应，一方面可以影响动物性别分化, 另一方面又可以缩短动物的成长周期, 因此会被一些不法水产养殖户加入饲料中用来提高水产品的饲养效率。[3]当水环境中的雌情化物质高于干扰阈值则会导致鱼类等水生生物雌性化, 造成水生生物性别比例失调, 种群密度受到影响, 甚至通过食物链对生态系统构成威胁。[2]这些雌激素一般较稳定, 不易被降解, 通过食物链进入人体后, 仍具有较强的生物活性,对人体产生致癌、损伤生殖功能、导致神经系统和免疫系统异常等严重危害。[3]其中人工合成的类固醇列雌激素EE2（避孕药的主要成分），其雌情活力最强，浓度低至0. 1ng/L就会有效刺激血浆VTG的产生,[4,5]性质稳定，在污水处理过程降解程度低（40%）[6]，因此流入生态系统后危害不容忽视。 本实验中我们采用固相萃取柱来浓缩富集提取样品中的炔雌醇，然后利用高效液相色谱来测样品中的炔雌醇含量，并计算回收率。 实验材料与设备 纯甲醇，EE2标液2ug/ml，C-18萃取柱，用于高效液相色谱的纯水、甲醇、乙腈，固相萃取C-18柱用玻璃棉。圆形氮气吹干仪。岛津高效液相色谱。 色谱条件：Inertsil ODS-SP-C18(150mm*4.6mm,5um)；流动相为甲醇/乙腈/水（体积比为25：35：45）；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：20ul；荧光检测器波长：激发波长为280nm，发射波长为310nm。 实验流程 标准溶液的配置：分别取2ppm的炔雌醇标准溶液0.25ml，0.50ml，1.00ml，2.00ml，5.00ml,7.50ml，分别定容到10ml，得到0.05ug/ml，0.1ug/ml，0.2ug/ml，0.4ug/ml，1ug/ml,1.5ug/ml的标准样品，摇晃均匀，进高效液相色谱分析。 固相萃取柱的制作：取6ml固相萃取玻璃柱管，在柱底铺入一定量的剪碎玻璃棉，称取C-18填料0.2g加入柱管，滴入两滴纯甲醇，上面再铺一层剪碎玻璃棉，用玻璃棒填平压实。 配液萃取：填充柱做好后先用5ml纯甲醇洗脱活化柱子，再用5ml水洗脱柱子。同时取0.5ml0.2ppm雌激素样本定容到100ml，将100ml样液依次进萃取柱洗脱，再用5ml水洗脱，最后用10ml纯甲醇洗脱，洗脱液收集至小试管中。 氮吹进样：将小试管在50℃的条件下氮吹。氮吹后的样品用2ml纯甲醇溶解，进高效液相色谱进行色谱分析。 结果与讨论 1.结果： 标准样品： 标样号 保留时间/min 峰面积 峰高 1 12.542 249258 13451 2 12.550 469437 25738 3 12.541 918550 49956 4 12.534 1836694 99731 5 12.542 4632998 251042 6 12.534 7200609 384499 用Excle作图得： 如图所示：以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，拟合点得模型公式 ——y=5*106x+2557.8,R2=1 待测样品上机后得保留时间12.506min，峰面积2137376，峰高107998。代入模型公式可得待测样品的浓度为0.427ppm。 得回收率为：85.4%。 （注：标准样品原本有第七个点，由于拟合后公式的R2变为0.99951，因此将第七个点舍弃掉了。） 第七个样品点的色谱图： 2.讨论： 分析数据，根据炔雌醇的回收率来看，比已有的实验回收率要稍微偏低，主要分析原因如下： ①萃取柱做的不好，C-18和玻璃棉没有压实，因此导致萃取不完全，会影响回收率 ②萃取时流速没有控制好，时快时慢，影响了萃取效果，进而影响了回收率 ③氮吹时气流不稳定，时强时弱，有待测样液被气流吹出试剂管，造成待测样品遗失， 进而影响回收率。 结论 总的来讲本次试验进行顺利，但由于操作的不当和仪器运用的不熟练造成了待测样品的遗失，回收率不高。我们的标准样品的标准曲线做的很成功，曲线拟合很好，拟合度为1。查阅相关资料时我发现，在对水中雌激素的研究中，浓缩萃取柱和高效液相色谱仪对分析起了重要作用。在本次试验中，我们学会了使