发酵菌微生物学检验.docVIP

非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli) 1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。 （1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。 （2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。 （3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。 2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科： （1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群 ①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食 酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单 胞菌属、希瓦菌属等 （2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属 （4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科 3. 非发酵菌的基本鉴定要求 （1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。 （2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。 （3）麦康凯上生长很差或不生长。 （4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。 4. 重要的鉴定试验 （1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。 （2）氧化酶试验： （3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。 （4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。 （5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。 （6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。 （7）硫化氢：腐败希瓦菌是非发酵菌中唯一在KIA和TSI上产硫化氢的菌种。 5. 常见不发酵G-杆菌的初步分群鉴定 O-F试验：O/F培养基（蛋白胨和糖类的比例为1:5），溴甲酚紫指示剂，其中一管用石蜡密封，另一管暴露于空气中。 （一）、. rRNAⅠ群 / 假单胞菌属(Pseudomonas) 1.（1）直或微弯无芽孢G-杆菌， OXI+，动力+（一个或多个极鞭毛），严格需氧，氧化利用葡萄糖、触酶+、 McC生长，水溶性色素。 （2）本属包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌、门多萨假单胞菌、产碱假单胞菌和类产碱假单胞菌。 2. 铜绿假单胞菌 （1）分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌，也是医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感染。 （2）感染多发生于烧伤、急性白血病、器官移植病人及静脉药瘾者，感染多位于潮湿部位，如气管造口、留置的导管、创面、外耳道、角膜和渗出性皮肤伤口处 （3）囊性纤维化病人呼吸道分离的铜绿假单胞菌具有生物膜（其产生的大量藻酸盐包围了菌体所致），导致本病的治疗困难和高死亡率。 （4）其淡蓝色脓性渗出物及绿脓素的生姜样气味具有特征性。 3. 铜绿假单胞菌的耐药性 （1）本菌对氨苄西林、安美汀、四环素、优力新、一、二代头孢菌素、头霉素、大环内酯类、磺胺等天然耐药 （2）各种抗生素治疗过程中都可能产生耐药，耐药率及多重耐药株上升较快。 （3）耐药机制：生物膜及外膜障碍、胞外灭活或钝化酶、主动外排系统将抗生素泵出胞外、抗菌药物作用靶位改变 4. 生物膜 （1）生物膜由依靠胞外产物而吸附于固体表面的微生物集落构成，并能结合有机和无机成分，形成包含复杂的理化过程和生物群落的相互作用。 （2）如正常菌群与上皮细胞表面受体结合而黏附，并分泌胞外多糖聚合物，使细菌以非常精细的方式相互粘连，形成膜状物，能发挥屏障和占位性保护作用，使外来病菌不能定植而通过侵入门户侵袭机体。 5. 铜绿假单胞菌感染的控制：（1）易感危重病人不应安排在已有过铜绿假单胞菌感染的病房；各种抗菌药物、溶液、软膏、器械等应避免被铜绿假单胞菌污染；采取适当的分型方法对感染菌株进行流行病学调查和监控；噬菌体治疗： 6. 铜绿假单胞菌的检验 （1）标本采集：按疾病和检查目的，分别采取不同的标本：患者的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、尿液、十二指肠引流液、粪便等； （2）医院病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活用品。 （3）标本镜检为G-，有动力的杆菌 （4）分离培养：普通培养基经18-24h形成圆形、扁平隆起、光滑湿润菌落。大多数产