库的构建.docVIP

cDNA文库的构建在细胞分化方面的知识 （一）在某种特定细胞中的某个特定时期提取总RNA（mRNA与micro-RNA、NATs、long no-coding RNA）： 以小鼠股骨组织为例； 以小鼠骨髓巨噬细胞系RAW264.7为例； 以原代小鼠骨髓巨噬细胞（纯度70%？）为例； cDNA文库（百度） 以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中，在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因，因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。 目录 1概述 2定义 3原理 4注意事项 5 mRNA ? 制备 ? 来源 ? 完整性 ? 丰度 ? 分离 6 TRNA 7 cDNA ? 第一链 ? 第二链 ? 自身引导 ? 置换合成 8克隆 9筛选鉴定 10载体制备 11鸟枪法 12物化方法 13分离基因 14化学合成 15 PCR 1概述 cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板，逆转录形成的互补DNA（cDNA）与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的