第34章-DNA的复制和修复(2015-5-11)-3.pptVIP

5′→3’ 聚合酶活性 3’→5′ 外切酶活性 无 5’→3’ 外切酶活性 它只是在无pol I及pol Ⅲ的情况下才起作用，其真正的功能也未完全清楚，可能在损伤修复中有特殊作用。 ① 结构特点：含锌原子 由10种亚基组成不对称异源二聚体。 核心酶（αεθ） α亚基：5′→3 ′聚合酶活性 ε亚基：3 ′→5′外切酶活性和 碱基选择功能，是复制保真性所必需 θ亚基:可能起组装作用 β亚基：夹稳模板链并使酶沿模板链滑动,维持进行性 γ-复合物：促进全酶组装至模板及增强核心酶活性 PPP OH 5 3 P OH 5 3 5`→3`聚合酶 P OH 5 3 3→5 外切酶 PPP OH 5 3 如果进行下一轮反应，5需要重新活化 1 2 3 错误后校对 3 → 5复制方向 ？ 最初 第二节 DNA的损伤和修复 DNA损伤 (DNA damage)：是指DNA结构改变而引起的遗传信息的改变。 DNA的自发性损伤 碱基错配： 碱基异构、脱氨基和修饰 物理因素引发的损伤 紫外线 电离辐射 化学因素引发的损伤 碱基烷基化、碱基脱落等 碱基类似物 P427 ?? DNA的损伤修复 修复形式 损伤特点 pol 修复特点 直接修复 不打断链，不切除 错配修复 修复复制错配碱基 pol Ⅲ 切除可达1000nt 碱基切除修复 修复单个碱基损伤 pol 1 先去除碱基，再切几个nt 核苷酸切除修复 修复较大的损伤 pol 1 如，切除13或29nt SOS反应 很大的损伤 pol 1 (Ⅳ/Ⅴ ) 错配修复(修复复制中错配的错误) 1、定义：在含有错配碱基对的分子中使正常的核苷酸序列恢复的修复方式。 2、参与错配修复的酶与蛋白质： Dam甲基化酶; MutH、MutL、MutS蛋白;解螺旋酶Ⅱ; 外切酶Ⅰ、Ⅹ 、Ⅶ ； RecJ核酸酶; SSB; DNA聚合酶Ⅲ ; DNA连接酶 ； ?? （一） DNA错配修复 Dna B Dna G Dna C HU ?? DNA错配修复 A C 识别新生链中非 m6A 的GATC序列 DNA聚合酶Ⅲ ; DNA连接酶 ； 大肠杆菌的错配修复过程 大肠杆菌的错配修复 新合成的子代链未甲基化 几分钟后， 新合成的子代链甲基化 大肠杆菌的复制起始的调控？ 拓扑异构酶 细菌领头链和随从链的延长差异 前导链：DNA旋转酶，解螺旋酶，SSB，DNA聚合酶Ⅲ，焦磷酸酶 细菌领头链和随从链的延长差异 ? 前导链 滞后链 前 体 dNTP: dATP, dGTP, dCTP, dTTP dNTP: dATP, dGTP, dCTP, dTTP NTP: ATP, GTP, CTP, UTP 酶 DNA旋转酶，解螺旋酶，单链DNA结合蛋白（SSB），DNA聚合酶Ⅲ，焦磷酸酶 DNA旋转酶，解螺旋酶，单链DNA结合蛋白（SSB），DNA聚合酶Ⅲ，焦磷酸酶，引物酶，DNA聚合酶Ⅰ，DNA连接酶和NAD+ 复制延伸过程中的各种原料、酶或蛋白质因子 ) 复制体(replisome) 复制体：是在复制叉附近与DNA复制有关的酶和蛋白质因子，他们在复制叉上形成离散的复合物,彼此配合,进行高度精确的复制,这种结构称为复制体 (DNA polⅢ二聚体、引发体和DnaB等) 复制体的基本活动包括： 1）双链的解开； 2）RNA引物的合成； 3）DNA链的延长； 4）切除RNA引物，填补 缺口，连接DNA片段； 5）切除和修复错配碱基。 P421 3. E. coli DNA合成的终止 现已发现有两个终止区域 （terE,D,A 和ter C,B,F）， 位于相遇点的另一侧100Kb 处。每一终止顺序对某一方 向移动的复制叉来说是特异的。 终止需要Tus(36kD)， Tus能识别ter保守顺序， 并阻止复制叉继续前进。 ter-Tus复合物可能通过 抑制螺旋酶来实行终止 E. coli DNA合成的终止 The two newly synthesized circular chromosomal DNAs are topologically interlinked (catenated) and is finally separated by theaction of a