〖医学〗基因组测序流程介绍教材教学课件.pptVIP

基因组测序流程介绍 中科院计算所生物信息学研究组 华大－曙光生物信息学联合实验室 卜东波 2001/10/07 第一部分：基础知识 1。细胞的结构（真核和原核） 2。细胞核中的染色体 3。染色体＝DNA＋相关蛋白质 4。DNA的双螺旋结构 5。碱基互补：A/T C/G 6。DNA复制 10。DNA上的基因 11。什么是电泳？ 在凝胶一端小槽中放入荧光标记的DNA片断，两端加电压，短DNA片断跑得快，长DNA片断跑得慢。 测序时需要区分长度只差一个碱基的片断 12。什么是PCR? DNA体外扩增方法的一种，能够将很少的试样（比如只有罪犯的一滴血），扩增成完全相同的无数拷贝。 每PCR一轮，扩增两倍 1-2-4-8-16… 第二部分：测序流程 1。什么是测序？ 确定一条染色体片断上的碱基顺序。 Sanger法： 在PCR时加入荧光标记的复制终止剂，比如ddA,ddT,ddC,ddG（相应于4种碱基） ddX的两个作用： 可以当作正常碱基参与复制 一旦链入DNA中，其后就不能再继续连接 电泳 谁终止，碱基就是谁 此方法获1974年的Nobel奖 Sanger第一步：加入复制终止剂 荧光检测探头 电泳，看谁跑得快 Sanger第二步：荧光检测 Shotgun测序 DNA的提取和纯化 载体预备：和DNA片断结合，从而能够在细菌中扩增。 DNA片段的制备：将DNA用超声波切成能够测序