第二节 淋巴细胞的检测技术一.淋巴细胞的分离 （一）外周血.pptVIP

第二节 淋巴细胞的检测技术 一.淋巴细胞的分离 (一)外周血单个核细胞(淋巴细胞 90%)的分离 密度梯度离心法 (二）淋巴细胞亚群的分离及鉴定 1.E花环分离法： 人T细胞(表达CD2，即E受体）＋绵羊红细胞(SRBC) ? 形成E花环 ? 密度梯度离心，花环细胞沉降于管底 ? 裂解SRBC ? 获纯化T细胞 2.尼龙纤维分离法： 单个核细胞 ? 通过尼龙纤维柱 ? B细胞和单核细胞(粘附特性) T细胞(非粘附性) 3.免疫荧光法： 单个核细胞 + 抗CD3(或CD4，CD8)McAb ? +荧光素标记第二抗体 ? 荧光显微镜下鉴定CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞 4.流式细胞术（flow cytometry, FCM）： 荧光素标记抗体＋待检细胞?单列经过FACS?分离（荧光素不同）的细胞 * FACS：荧光激活细胞分类仪(fluorescent activated cell sorter) 5.磁珠分离术： (1)直接法： 免疫磁珠(磁性微粒结合抗体) + 细胞 ? 通过磁场 ? 分离磁珠结合细胞 ? +解离剂 ? 获纯化细胞 (2)间接法： 免疫磁珠(磁性微粒结合第二抗体) + 细 胞 + 抗体 ? 通过磁场