真核基因的大肠杆菌表达体系教材_课件.pptVIP

真核基因的大肠杆菌表达体系 大肠杆菌的表达载体 克隆的真核基因在大肠杆菌细胞中的表达 影响克隆基因在大肠杆菌中表达效率的因素;大肠杆菌表达体系 克隆基因正确表达的基本条件 克隆基因表达活性的检测;真核基因的大肠杆菌表达体系;大肠杆菌表达体系 优越性: 1. 对大肠杆菌的背景知识,特别是基因表达调控的分子机理有深刻的了解; 2. 是一种安全的基因工程实验体系,拥有各类适用的寄主菌株和不同类型的载体; 3. 许多克隆的真核基因都可以在大肠杆菌细胞中实现有效、高水平的表达; 4. 大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉,易用于批量生产。;大肠杆菌中表达体系的不足: 1. 真核基因,在结构上同原核基因之间存在着很大的差别。 2. 真核基因的转录信号同原核的不同。 细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子;外源基因可能含有具大肠杆菌转录终止信号功能的核苷酸序列。 3. 真核基因mRNA的分子结构同细菌的有所差异,影响真核基因mRNA稳定性。;4. 许多真核基因的蛋白质产物,都要经过转译后的加工修饰(正确折叠和组装),而大多数的这类修饰作用在细菌细胞中并不存在; 5. 细菌的蛋白酶,能够识别外来的真核基因所表达的蛋白质分子,并把它们降解掉。;克隆基因正确表达的基本条件 最基本条件:应该能够进行正