[理学]分子生物学技术原理.ppt

分子生物学实验技术与原理 一、分子生物学实验概述 一、分子生物学实验概述（续） 二、常用实验技术与原理 载体构建 2.1 质粒的提取 质粒的提取步骤 质粒的提取步骤 质粒DNA提取常见问题 质粒DNA提取常见问题 2.2 琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶分辨率 DNA电泳常见问题分析 2.3 酶切 影响酶切的因素 2.4 连接与转化 连接与转化常见问题 2.5 阳性克隆的鉴定 三、引物设计实例 构建pPICZaA-Bat表达载体 Bat天然序列 GTCATTGGAGGTGATGAATGTGACATAAATGAACATCCTTTCCTTGCATTCATGTACTACTCTCCCCGGTATTTCTGTGG TATGACTTTGATCAACCAGGAATGGGTGCTGACCGCTGCACACTGTAACAGAAGATTTATGCGCATACACCTTGGTAAAC ATGCCGGAAGTGTAGCAAATTATGATGAGGTGGTAAGATACCCAAAGGAGAAGTTCATTTGTCCCAATAAGAAAAAAAAT GTCATAACGGACAAGGACATTATGTTGATCAGGCTGGACAGACCTGTCAAAAACAGTGAACACATCGCGCCTCTCAGCTT GCCTTCCAACCCTCCCAGTGTGGGCTCAGTTTGCCGTATTATGGGATGGGGCGCAATCACAACTTCTGAAGACACTTATC CCGATGTCCCTCATTGTGCTAACATTAACCTGTTCAATAATACGGTGTGTCGTGAAGCTTACAATGGGTTGCCGGCGAAA ACATTGTGTGCAGGTGTCCTGCAAGGAGGCATAGATACATGTGGGGGTGACTCTGGGGGACCCCTCATCTGTAATGGACA ATTCCAGGGCATTTTATCTTGGGGAAGTGATCCCTGTGCCGAACCGCGTAAGCCTGCCTTCTACACCAAGGTCTTTGATT ATCTTCCCTGGATCCAGAGCATTATTGCAGGAAATAAAACTGCGACTTGCCCG Bat优化序列 AAAAGAGTTATTGGTGGTGATGAGTGTGACATTAATGAGCATCCTTTTTTGGCTTTCATGTACTACTCTCCAAGATACTT CTGTGGTATGACTTTGATTAACCAAGAATGGGTTTTGACTGCTGCTCATTGTAACAGAAGATTTATGAGAATTCACTTGG GTAAACATGCTGGTTCTGTTGCTAACTACGATGAGGTTGTTAGATACCCAAAGGAGAAGTTTATTTGTCCAAACAAGAAA AAGAACGTTATTACTGATAAGGACATTATGTTGATTAGATTGGATAGACCAGTTAAAAACTCTGAGCATATTGCTCCATT GTCTTTGCCTTCTAACCCACCTTCTGTTGGTTCTGTTTGTAGAATTATGGGATGGGGTGCTATTACTACTTCTGAGGATA CTTACCCTGATGTTCCACATTGTGCTAACATTAACTTGTTTAACAACACTGTTTGTAGAGAGGCTTACAACGGTTTGCCA GCTAAAACTTTGTGTGCTGGTGTTTTGCAAGGTGGAATTGATACTTGTGGTGGTGATTCTGGAGGTCCATTGATTTGTAA TGGTCAATTTCAAGGTATTTTGTCTTGGGGTTCTGATCCTTGTGCTGAACCTAGAAAGCCAGCTTTTTACACTAAGGTTT TTGATTACTTGCCATGGATCCAATCTATTATTGCTGGTAACAAGACTGCTACTTGTCCATAATGA 菌落PCR鉴定引物序列 5’-CCG CTCGAG AAAAGA GTTATTGGT--3’ Xho Ⅰ 5’-TTATGGACAAGTAGCAGTCT--3’ Thank You! * * 1 2 3 分子生物学实验概述 常用实验技术与原理 引物设计实例分析 生物样品（细胞、组织、细菌） 细胞调节 神经科学 分子诊断 DNA分离 RNA分离 质粒DNA 噬菌体DNA 基因组DNA 总RNA mRNA cDNA 重组DNA PCR 遗传鉴定 DNA测序 DNA标记 突变 基因表达 基因表达 报告基因载体 基因转化 报告基因检测 真核转录 体外转录 翻译 蛋白 蛋白分析 蛋白分离 表达载体的构建 目的蛋白表达 下游的发酵与