[理学]微生物检验.ppt

第二章 生理生化试验 一、生理生化试验的概念 及其类型 二、常见的生理生化试验 一、生理生化试验的概念及其类型 （一）定义 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。 （二）设计原则 在试验中加入某些 化学物 质，使细菌代谢途径中分解代谢产物与加入的化 学物质发生反应，产生某些变化或出现某种特征。 （三） 生理生化试验的类型 1 .糖（醇）类代谢试验 2 .氨基酸和蛋白质代谢试验 3 .有机酸盐和铵盐的利用试验 4 .呼吸酶类试验 5 .毒性酶类试验 （四）生理生化试验的方法 1. 在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 2. 根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 3. 根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。 4. 在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。 （五）生理生化试验的注意事项 1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。 二、常见生理生化试验 （一）过氧化氢酶及过氧化物酶试验原理 1、2H2O2 过氧化氢酶 2H2O+O2 阳性：气体产生 2、过氧化物酶： RH2+H2O2 过氧化物酶 R+2H2O 阳性：细菌变为黑褐色； 阴性： 不变色。 （二）细胞色素氧化酶试验原理 细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化型细胞色素C +对苯二胺 + ? --奈酚 靛酚兰（蓝色） 阳性： 2分钟内生成蓝色为阳性 阴性：无变化。 （二十一）动力学试验 有鞭毛的细菌在半固体培养基中除了沿穿刺线生长外，在穿刺线周围可见到羽毛状或云雾状浑浊生长。 第一节 细菌菌落总数测定 第二节 大肠菌群检验 第一节 菌落总数测定 一、定义 （一）定义 菌落总数（aerobic plate count）是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1g（或1mL）检样中形成菌落的总数。 实际上只包括在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌。 （二）卫生意义1.可作为判定食品被污染程度的标志； 2. 可用来观察细菌在食品中繁殖的动态； 3. 为食品进行卫生学评价提供依据。 第一节 菌落总数测定 二、原理 样品经稀释后，使样品悬液中的微生物分散存在，接种一定量到培养基中，充分混匀。从理论上来说微生物在培养基中分散呈单个存在，一个菌体长出一个肉眼可见的菌落，计算菌落数可推出菌体数。 五、稀释度选择方法 （一）根据食品卫生标准选择 1.使平板上菌落数落为30～300cfu； 2.若落不到30～300cfu，尽量接近30cfu或300cfu； 3.使平板上菌落数宁多不少 （二）根据对样品污染程度的估计 第二节 大肠菌群计数 一、定义 大肠菌群系指一群在36oC 条件下培养48h能发酵乳糖、产酸、产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。 食品（目前大多数国标规定）中大肠菌群数系以每100毫升（克）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。 二、选择粪便污染指标菌应具备的条件 1、这种菌在人和温血动物中普遍存在，且数量较多； 2、在水和食品中生存时间与肠道致病菌相当或稍长； 3、在粪便污染的水和食品中容易找到，未污染的水和食品中不能发现； 4、对氯的低抗力与肠道致病菌相似； 5、检验方法比较简单，易于检出。 三 、大肠菌群数测定的卫生学意义： 大肠菌群包括：艾希氏菌属、肠杆菌属、柠檬酸杆菌属、 克雷伯氏菌属 新鲜粪便中艾希氏菌属占优势。 1、大肠菌群作为粪便污染指标菌，既包括近期污染又包括远期污染，具有广泛的卫生学意义，对人的安全保险系数更大了； 2、测定大肠菌群含量表明食品、饮料被粪便污染的程度：如果菌数含量越多，表明粪便污染越严重，并间接表示有肠道致病菌污染的可能性。 四、大肠菌群数测定原