[管理学]15 载体.pdfVIP

基因克隆载体 载体 （vector ）：能携带外源gene 进入受体细胞的运载工具。 克隆载体条件：可转移性 复制原点或整合原点 多种单一的酶切位点 选择标记 基因安全性 一、质粒载体 （Plasmid ） 存在于细胞中，能独立于染色体之外进行自主 复制的共价、封闭、环状双链DNA分子，CCC分 子。（covalently closed circular DNA ） 天然质粒：没有经过以基因克隆为目标的 体外构建改造的质粒，具自主复制能力和可供 选择的遗传标记。 1.Plasmid的生物学特性 （1 ）质粒 DNA 例外：酵母Killer Plasmid是RNA质粒 其余 DNA 分子 构型：SC构型、L构型、OC构型 电泳 快→慢 开环DNA cccDNA CsCl密度梯度离心法提取CCC分子 （2 ）分类 ①由自身传递性质分 结合型 （conjugative plasmid ） 自我转移 F 、Ti、部分R 、部分Col 非结合型 （non-conjugative plasmid ） 非自我转移 部分R 、部分Col ②由是否引起宿主细胞出现新性状分 R质粒：抗性质粒 显 性 Col质粒：产生coli素 （colicins ）的质粒 质 粒 F质粒：引起细胞接合的育性质粒 Ti质粒：使植物形成冠瘿瘤 隐性质粒 ③由复制特性分 严紧型 （stringent plasmid ）1-3 copy 松弛型 （relaxed plasmid ） 10-60 copy 质粒的copy数：一种质粒在一个细胞 中的存在数目。 非结合型：相对分子质量小 copy数多 松弛型复制 （3 ）质粒的不亲和性 （plasmid incompatibility ） 不同质粒不能同在一个细胞中的现象。 2.理想质粒载体构建的基本原理和方法 （1 ）基本原则 合适的出发质粒 （亲本质粒） 获得构建载体的元件 选择标记基因 启动子 提高外源DNA容量 灭活某些编码基因 力求简单 • 利用α互补进行标志补救筛选： 多克隆位点 ß-半乳糖 ß-半乳糖苷 E.coli amp pUC18 苷酶C端 r 酶N端编码序 编码序列 列 转化 启动子 pUC18 克隆载体与宿主