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利用转基因技术构建生物反应器的研究进展综述 （转基因技术与应用） 摘要：转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入细胞和（或）生物体内，并通过导入基因的表达引起生物体性状的可遗传性修饰的生物学技术。目前生物反应器正在研究探索阶段，重组人干扰素 α-2b在大肠杆菌中分泌表达为利用大肠杆菌大规模生产干扰素奠定了基础，利用烟草表达充足人胰岛素原为生产胰岛素提供了新的途径，转基因鸡生物反应器载体的构建为转基因鸡生物反应器的构建提供依据，人乳铁蛋白cDNA基因乳腺表达载体的构建为乳腺生物反应器奠定了基础。由于对转基因技术可能造成的影响尚未明确，针对其可能出现的风险我们必要尽心交流讨论。 关键词：转基因技术；生物反应器；风险讨论。 前言：21世纪是生物科学的世纪，转基因技术自问世以来，一直受到世人的各 种猜测与怀疑，但是它还是以迅猛的速度发展着。目前，转基因技术已经 在农业与工业方面带来了巨大的经济及社会方面的效益。在疾病多发的今天，许多难以攻克的疾病所需药物的原料多数都难以获取或利用传统制药方法产率极低。应用转基因技术，我们可以提高药物的产量，降低药物生产成本而且可以创造药物新品种。利用转基因技术我们还可以生产真核基因编码的蛋白质。同样的，我们可以通过改变酶分子基因结构，增加酶的稳定性，提高反应速率。转基因技术将在工业，农业等各方面创造巨大的经济、社会效益。 转基因技术操作原理与生物反应器简介： （一）、转基因技术的操作过程主要包括：目的基因的获取，载体的选择与制备，DNA分子的体外连接，外源基因导入宿主细胞，目的基因的筛选与鉴定等。下面对其中的几个步骤进行简要的介绍。 目的基因的获取： 获取目的基因的方法主要有：从基因文库中获得，从cDNA文库中获得， 人工合成，PCR扩增特定基因。 载体的选择与准备: 选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制性酶 切位点，如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表 达载体。表一则提供几种常用载体的使用范围： 比较内容 质粒 λ噬菌体 粘性质粒 M13噬菌体 克隆容量 ＜10kb ＜22kb 40kb~50kb ＜1kb 基因组DNA文库 - + + - cDNA文库 + + - - 亚克隆 + - - + 序列分析 + + - + E．coli表达 - + - - 注：+表示可用，-表示不可用 表一 无论选择何种载体，首先都要获得载体分子。获得载体DNA后，采用适当的限制性内切酶将载体DNA进行切割，获得线性DNA分子后，用碱性磷酸酶处理，去掉5′端磷酸，以便与目的基因片段进行连接。 DNA分子的体外连接： 选择好合适的载体并做适当处理后，便可将载体与目的基因连接，主要方法有四种:粘性末端，使用人工接头，加入同聚物尾，平端连接。 外源基因导入宿主细胞：将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主细胞并使其获得新的表型或以噬菌体，粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒后感染适当细胞，并在细胞内繁殖，或使得真核细胞主动摄取、被动导入外源DNA片段而获得新的表型的。 目的基因的筛选与鉴定:将外源基因导入到宿主细胞后，首要任务就是筛选含有目的基因的阳性克隆体并加以扩增。主要包括三个步骤：首先筛选出带有载体的克隆，然后筛选出带有重组体的克隆，最后筛选出带有特异性DNA序列的克隆。 、生物反应器简介： 生物反应器是利用生物体所具有的生物功能，在体内或体外通过生化反应 或生物自身的代谢目标获得目标产物的装置，细胞，组织器官，生物体等 等。通过人类有意识的调控与选择，可以使目标产物的产量远远高出自然 方式产生的量。 转基因技术构建生物反应器研究进展报告： 重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达 人干扰素α-2b原始基因在重组原核工程菌中表达量偏低，所以在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下，根据大肠杆菌密码子偏爱性使用定向突变技术对huIFα-2b基因进行点突变，将大肠杆菌STⅡ信号肽基因与突变后的 huIFα-2b基因融合并于信号肽5′端和huIFα-2b基因3′端引入合适的酶切位点。融合基因克隆至载体pCSE，pET-22b和pPAK4L中，它们分别含有组成型启动子、T7启动子和phoA启动子。融合基因在载体实现huIFα-2b的高表达，但STⅡ信号肽不能被有效切除。含有phoA启动子的载体pPAK4L在其E.coli W3110中可以实现huIFα-2b较高水