第四章_核酸电泳与检测教材教学课件.pptVIP

4.注意事项 1、溴乙锭(EB)是诱变剂 ，应戴乳胶手套。凡是沾污过溴乙锭的器皿或物品,必须经专门处理后，才能进行清洗或弃去。 ????2、加样量的多少决定于加样孔最大容积。加入样品的体积应略少于加样孔容积。 ???? 核酸凝胶电泳 用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA片段 优点： 便于分离；便于检测；便于回收 1.基本原理 琼脂糖凝胶电泳是以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。 (1)电荷效应 在 pH 值为 8.0～8.3 时， DNA分子在高于其等电点的溶液中,核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。 (2)分子筛效应 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型。 分子量较小的DNA分子，比分子量较大的DNA分子迁移率要快； 同等分子量的不同构型的核酸分子，cccDNA＞IDNA＞ocDNA （3）DNA分子的大小 在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数值成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。 根据标准DNA相对迁移距离推测待测定的DNA片段的大小 如何提高核酸电泳的分辨率？ （4）凝胶电泳的分辨力与凝胶的类型和密度相关 一、凝胶类型 1.琼脂糖凝胶