实验八 RT-PCRRT实验.ppt

实验八 RT-PCR——（1）RT实验 RT-PCR:逆转录聚合酶联反应RT: Reverse transcriptase transcription 一、实验目的 了解RT-PCR的技术原理； 通过本实验学习用试剂盒进行RT-PCR的方法。 二、RT-PCR的基本原理 RNA是一类极易降解的分子。首先RNA在逆转录酶作用下反转录为cDNA第一链：脱氧核苷酸引物与mRNA杂交，在RNA依赖的DNA聚合酶指导下合成互补的cDNA序列； 然后在DNA聚合酶的作用下扩增目的基因：PCR第一个循环由正义引物(oligo-dT)和cDNA第一链退火结合，在DNA依赖的DNA聚合酶指导下合成第二链，从PCR第二循环起开始扩增目的片段。 TakaRa RT-PCR 试剂盒(AMV装)概述 本试剂盒适用于各种RNA制品（包括RNA病毒）的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV （禽源的）进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物，约1-2kb。 同时，在10μl反转录体系，50μl PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续克隆实验。 三、实验仪器、材料与试剂 仪器 1. 200℃以上烘箱 2. 低温离心机 3. 恒温水浴锅 4. 微量移液器 材料 试剂盒组成及包装