[高等教育]24菌种改良.pdfVIP

第四节 生产菌种的改良 菌种选育改良的目标 • 提高目标产物的产量 • 提高目标产物的纯度，减少副产物 • 改良菌种性状，改善发酵过程 • 改变生物合成途径，以获得高产的新产 品 菌种改良方法 • 诱变育种★★★ • 细胞工程育种★★ • 杂交育种 • 原生质体融合 • 基于代谢调节的育种技术★ • 基因工程育种★ • 蛋白质工程育种 • 组合生物合成育种 • 反向生物工程育种 一、诱变育种 • 人工诱变能提高突变频率和扩大变异谱， 具有速度快、方法简便等优点，是当前菌 种选育的一种主要方法，使用普遍。 • 诱发突变随机性大，必须与大规模的筛选 工作相配合才能受到良好的效果。 1. 出发菌株的选择 2. 菌悬液的制备 3. 前培养 4. 诱变 5. 变异菌株的分离和筛选 （一）诱变育种中需考虑的若干因素 1. 选择合适的出发菌株 2. 复合诱变剂的使用 3. 诱变剂剂量的选择 4. 变异菌株的筛选 • 选择合适的出发菌株 产量高、对诱变剂的敏感性大、变异幅度大。 • 从自然界分离得到的野生型菌株； • 通过生产选育，即由自发突变经筛选获得的高 产菌株； • 已经诱变过的菌株。 • 诱变剂 物理诱变剂 各种射线，如紫外线、X射线、β射线、γ射线、 α射线和超声波等 化学诱变剂 甲基磺酸乙酯（EMS）、亚硝基胍（NTG）、亚硝酸、氮芥等。 • 诱变剂剂量 • 既能增加变异幅度又能促使变异向正变范围移动的 剂量就是合适剂量。 • 对于经过多次诱变而提高了产量的菌株，在较高剂 量负突变率更高。 • 因此，目前处理剂量已从以前采用的死亡率90～99 ％减低为70～80％。 • 诱变剂的选择主要根据已经成功的经验，与诱变剂 本身特点、菌种的种类和出发菌株的遗传背景等有 关。 各种化学诱变剂常用的剂量和处理时间 诱变剂 诱变剂的剂量 处理时间 缓冲剂 中止反应方法 亚硝酸（HNO2 ） 0.01～0.1M 5～10min pH值4.5，1M醋酸缓冲 pH8.6，0.07 液 磷酸二氢钠 硫酸二乙酯（DES ） 0.5～1％ 10～30min， pH值7.0，0.1M磷酸缓 硫代硫酸钠或 孢子18～24h 冲液 大量稀释 甲基磺酸乙酯（EMS 0.05～0.5M 10～60min， pH值7.0，0.1M磷酸缓 硫代硫酸钠或 ） 孢子3～6h 冲液 大量稀释 亚硝基胍（NTG ） 0.1～1.0 15～60min， pH值7.0，0.1M磷酸缓 大量稀释 mol/mL， 90～120min 冲液或Tris缓冲液 孢子3mg/mL 羟胺（NH2OH·HCl ） 0.1～0.5 ％ 数小时或生长 大量稀释 过程中诱变 氯化锂（LiCl ） 0.3～0.5 ％ 加入培养基中 大量稀释 ，在生长过程 中诱变 秋水仙碱（C22H25NO6