微生物学检验分枝杆菌属及检验参考.pptVIP

分枝杆菌属 分枝杆菌属主要特点 是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。 细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。 具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用抗酸染色。 专性需氧营养要求特殊，大多数生长缓慢。 不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，所致疾病呈慢性。 分枝杆菌属种类 结核分枝杆菌－－形态染色 细长略弯，分枝生长趋势 无芽孢，无鞭毛，部分菌株有荚膜 革兰染色阳性，不易着色 抗酸染色阳性 结核分枝杆菌－－培养特性 生长条件： 专性需氧、细胞内寄生菌、最适pH6.5～6.8、营养要求高、培养基含鸡蛋、马铃薯粉、甘油、孔雀绿等 生长现象： ※生长缓慢 ※改良罗氏培养基菌落特征：干燥、淡黄色、 质地较硬的R型菌落 ※液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长 结核分枝杆菌－－生化反应 生化反应不活泼，不发酵糖类 与非结核分枝杆菌鉴别： 耐热触酶试验－；（非结核分枝杆菌＋） 与牛分枝杆菌鉴别 烟酸试验＋；（牛分枝杆菌－） 结核分枝杆菌－－抵抗力与变异性 抵抗力特点：“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000） ※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长期使用易产生耐药性） 变异性 ※典型形态－→多形性 ※ R型菌落－→S型菌落 ※有毒－→无毒（用于制备疫苗） ※抗结核药敏感－→耐药 结核分枝杆菌－－致病物质 脂质 索状因子:与该菌毒力有密切关系 磷脂: 分枝菌酸：与抗酸性有关 蜡质D:具有佐剂作用 硫酸脑苷脂 蛋白质 糖类 结核杆菌不产生内、外毒素，不产生侵袭性酶 结核分枝杆菌－－所致疾病与免疫性 经多途径感染，引起结核病，以肺结核多见 类型：原发感染和继发感染 免疫性 ※抗结核免疫以细胞免疫为主 ※抗结核免疫属带菌免疫 ※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现 结核分枝杆菌－－结核菌素试验 原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的试验。 结果：根据注射部位是否出现红肿判断结果 ＜5mm为阴性≥ ＞ 5mm为阳性 ＞ 15mm为强阳性 应用：选择卡介苗接种对象；判断卡介苗接种效果；辅助诊断婴幼儿结核病；测定肿瘤患者细胞免疫状态 结核分枝杆菌－－检验程序 结核分枝杆菌－－涂片检查 直接涂片 薄涂片 厚涂片 集菌涂片 沉淀集菌法 漂浮集菌法 荧光显微镜检查法： 金刚胺O染色→荧光显微镜下检查 抗酸染色－－报告方式 结核分枝杆菌－－分离培养 标本前处理： ※目的：杀死杂菌；液化标本 ※方法： 4％NaOH法； 4％H2SO2法； 胰酶-新洁尔灭法等 培养基选择：罗氏培养基、米氏培养基、小川培养基等 接种 培养 培养结果记录与报告方法 非典型分枝杆菌 是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。 大多为环境中的腐生菌 对酸碱比较敏感 对常用抗结核药耐受 为条件致病菌，艾滋病患者易感染鸟复合分枝杆菌 麻风分枝杆菌－－生物学性状 为抗酸杆菌 细胞内寄生 有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞 体外人工培养尚未成功 犰狳是动物感染模型 麻风分枝杆菌－－临床意义与微检 经呼吸道、接触感染 引起麻风病 瘤型麻风（开放型）：传染性强 结核样型（闭锁性）：传染性弱 微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的主要依据 麻风杆菌 犰狳 抗酸染色 染液组成： 石炭酸复红、3％盐酸酒精、美兰 染色步骤 ※石炭酸加温染5分钟，水洗 ※ 3％盐酸酒精脱色致无红色脱下为止，水洗 ※美蓝染1分钟，水洗，干后镜检 染色结果 ※抗酸菌：红色 ※非抗酸菌：蓝色 染色意义：区别抗酸菌与非抗酸菌 结核分枝杆菌菌落 结核分枝杆菌（抗酸染色） 麻风病人 厌氧菌 概念: 是一大群必须在无氧环境条件下才能生长繁殖的细菌 特点: 种类多 分布广 感染可发生于人体各个部位 厌氧菌特点 厌氧菌感染的临床及细菌学特征 感染发生于黏膜附近 深部外伤 感染局部有气体产生 分泌物有恶臭或暗血红色 某些抗生素治疗无效的感染 标本直接涂片细菌染色不均 镜检见细菌,需氧培养无细菌培养 厌氧菌感染的原因 局部形成厌氧微环境 局部或全身免疫功能下降 菌群失调 寄居部位发生改变 厌氧菌－－标本采集与送检 采集 部位恰当 正确采集 避免污