荧光定量PCR仪操作规程.docVIP

荧光定量PCR仪操作规程 1开机程序 1） 打开电脑，进入桌面。 打开PCR仪器的电源开关（注：该仪器有两个电源开关，一个控制PCR仪，一个控制光源系统）。 双击桌面上的软件图标，点击“yes”,进入软件的主菜单。打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单：“RUN ENTER PROGRAM?”准备执行程序。2．关机程序 1) 保存数据，退出软件的主菜单。 2) 关掉电脑，关闭PCR仪器的电源开关。 程序文件的设置及打开 1)实验程序已预先设定 点击软件左方主目录中的“Library”，进入该界面后。选择“View Protocol”页面，根据路径，找到预存的程序文件。放入样本管，关紧盖子。运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：“-ENABLE?DISABLE??HEATED LID” 按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。2)创建新的程序文件 点击软件左方主目录中的“Workshop”，进入该界面。选择“Edit Protocol”页面，输入相应的温度、时间、重复的循环数（Repeats），增加或删除步骤（Cycle和Step），在“Select data collection step（s）”中选择需要进行荧光收集的步骤。完成后，在“Protocol Filename”中输入程序的文件名，点击“Save this protocol”。如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM，按《Proceed》，屏幕显示“ -NEW LIST EDIT DELET”，按《Proceed》，1）选择NEW，命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认。输入程序步骤：名字输入后，显示“ STEP1 TEMP GOTO?OPITON?END”，按《Proceed》则可以输入温度（0～100），按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上。选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步（循环数最多可达9999次）（为实际循环数-1)。选择option，显示“STEP EXTENDI NCREMENT SLOPE ”再选择increment，按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值（-0.1～6），按《Proceed》确认。选择extend，按《Proceed》确认，输入每个循环增加或减少的时间（-60～60秒），按《Proceed》确认。选择slop（指温度上升或下降的速率），输入温度的改变值（-0.1～1.5）按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认。选择End，输入结束步骤。输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。仪器操作程序 1)编辑样本 将装有反应液的PCR反应管放入PCR仪，记录样本摆放顺序。点击进入软件左方主目录的“Workshop”界面，选择“Edit Plate Setup”页面。点击“Samples：Whole Plate loading”，根据样本摆放的顺序和样本属性，选择相应的图标（Unknown和Standard），在plate上相应位置作标识，是标准品（Standard）的，在屏幕右下方的“Standard Quantity”中输入相应浓度。点击“Select and load fluorophores”，在“1. or deselect a fluorophore”中选择荧光标记，在“2.Assign a color”中选择该标记相对应的颜色，然后在plate上对 1.3所选择的孔位进行荧光标记。完成后，在“Plate Setup Filename：”中输入样本文件的文件名，点击“Save this plate setup”。 2)运行 编辑样本完成后，在该页面下点击“Run with selected protocol”。转入“Run Prep”页面，确认“Select run purpose”所选的是“PCR Quantification Melt Curve”和“Select well factor source”所选的是“Experimental Plate”，核对一下“Selected Protocol”和“Selected Plate”的文件名是否正确。然后在“Sample volume”中输入反应体系，点击“Begin Run”，在弹出的对话框中输入要保存的数