[高三理化生]DNA重组技术的基本工具.pptVIP

专题1 基因工程 1.1DNA重组技术的工具 1973年转基因微生物——转基因大肠杆菌问世 1980年第一个转基因动物──转基因小鼠诞生 1983年第一例转基因植物──转基因烟草出现 人类有了一双创造新生物的“上帝之手” 基因工程 思考：基因工程实现了一种生物的某些性状在另一种生物中表达。这些性状的表达与我们学过的基因的什么过程有关？ 基因工程的三种必需工具 “分子手术刀”──限制酶 “分子缝合针”──DNA连接酶 “分子运输车”──基因进入受体细胞的载体 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 单细胞生物，如何抵御入侵的外源DNA？ 利用酶让外来的DNA失效。 特殊的酶能识别外来侵入的DNA并将其分解，而对自身的DNA不能起作用。 1.主要来源：原核生物 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 2.作用特点： 它们能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 EcoRI限制酶识别 的核苷酸序列，从 之间切开。 SmaI限制酶识别 的核苷酸序列，从 之间切开。 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 3.结果： ①黏性末端②平末端 　 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 动手做一做： 在质粒中分别找出EcoRI,SmaI和HindⅢ限制酶的切割位点，利用限制酶（剪刀）对其进行切割，并写出其切割后的结果，注明是黏性末端还是平末端。 思考： ①你所制作的DNA片段能称得上一个基因吗？ 不能，一般基因有上千个碱基对。 ②用限制性内切酶切割一次要切断几个磷酸二酯键？产生几个黏性末端？ 要切两个磷酸二酯键，产生两个黏性末端。 ③用限制性内切酶切一个特定基因要切开几个切口？切断几个磷酸二酯键？产生几个黏性末端？ 要切两个切口，切断四个磷酸二酯键，产生四个黏性末端。 ④两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，产生的黏性末端相同么？ 会产生相同的黏性末端。 DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶是将双链的DNA片段连接起来，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来。 相同之处都是通过形成磷酸二酯键来连接的。 1.连接部位：是磷酸二酯键（扶手） 不是氢键（梯子） DNA连接酶——“分子缝合针” 2.种类 E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端。 T4 DNA连接酶既可连接黏性末端， 也可连接平末端， 但平末端之间连接的效率比较低。 　 磷酸二酯键 DNA连接酶——“分子缝合针” 动手做一做： 在刚才的DNA片段中，找出黏性末端，利用E·coli DNA连接酶将其连接起来。写出连接结果。 找出平末端，利用T4 DNA连接酶将其连接起来。写出连接结果 。 思考： ⑤你连接后的碱基能配对么?如不能配对，可能是什么原因造成的？ 剪切位点或连接位点选的不对。 ⑥能被DNA连接酶连接起的黏性末端应该具备什么特点？ 是由相同的限制酶切割形成的。 ⑦用DNA连接酶连接两个相同的黏性末端要连接几个磷酸二酯键？ 两个磷酸二酯键。 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1.作用：将外源基因送入受体细胞。 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 从化学组成来看，载体应含有什么成分？ 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？ 能否用SARS病毒作为基因载体？ 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 2.条件： 能自我复制； 有切割位点； 有遗传标记基因； 对受体细胞无害，易分离 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 3.种类： 质粒、噬菌体和动植物病毒。 思考： ⑧质粒上会存在某些标记基因，这些标记基因有什么用途？ 便于对受体中是否有外源基因导入进行检测和筛选。 ⑨要想将某个特定基因与质粒相连，需要用几种限制性内切酶处理？需要DNA连接酶作用几次？连接几个磷酸二酯键？ 需要一种限制酶，需要DNA连接酶作用两次，连接四个磷酸二酯键。 完成导学案练习 * * 顾利刚 DNA(基因)　　　mRNA 蛋白质(性状) 转录 翻译 DNA重组技术 苏云金杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 噬菌体侵染细菌 限制酶的识别序列： Go back 能被限制性内切酶特异性识别的切割部位都具有回文序列：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。 GAATTC C、G CCCGGG G、A Go back SmaⅠ 平末端　　　平末端 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏