[农业]复方鲜竹沥液微生物限度检查法的方法学研究试验资料.doc

脑心舒口服液微生物限度检查法的方法学研究实验资料 1目的 对供试品进行微生物限度检查时，确认所采用的细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法是否适合于该药品的微生物限度检查。本试验依据《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅢ C对其进行了微生物限度检查法的研究并验证，建立了该品种的微生物限度检查的方法。 2样品：脑心舒口服液 　　　批　 　号： 规格： 　生产单位： 3实验仪器： 高压蒸汽立式灭菌器LMQ.C 　山东新华医疗器械公司 微波炉 SANYO EM-3—11EB1 合肥荣事达三洋电器股份有限公司 电子天平 Sartorius BP2114 北京赛多利斯仪器系统有限公司 净化工作台 JB-CJ-2FQ 苏州佳宝净化工程设备有限公司 生物安全柜 BHC-1300 ⅡA2 　苏州安泰空气技术有限公司 细菌培养箱 DG-1 上海医疗器械修理厂 霉菌培养箱 MJX-250C 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 集菌仪 HTY-2000B 杭州高德医疗器械有限公司 一次性使用薄膜过滤器 4培养基 胆盐乳糖发酵培养基 批号胆盐乳糖培养基 批号玫瑰红钠琼脂培养基 批号营养琼脂培养基 批号：090315 营养肉汤培养基 批号：091012 改良马丁液体培养基 批号：090608 改良马丁琼脂培养基 批号：091006 　曙红亚甲蓝琼脂培养基　　　　　　　　批号：081001 5菌种 枯草杆菌 (Bacillus subtilis) [CMCC(B)63501] 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26003] 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44102] 白色念珠菌 (Candida albicans) [CMCC(F) 98001] 黑曲霉 (Aspergillus niger) [CMCC(F)98003] 6菌液制备 6.1取上述经35℃培养18－24小时的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜营养肉汤培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5 －10-7，约为50－100cfu/ml，做活菌计数备用。 6.2取经25℃ 培养18－24小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5 －10-6，约为50－100cfu/ml，做活菌计数备用。 6.3取经25℃ 培养1周的黑曲霉改良马丁斜面培养物，加5ml 0.9%无菌氯化钠溶液洗下黑曲霉孢子，吸取出孢子悬液1ml，加0.9%无菌氯化钠溶液适量稀释，用标准比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，取1 ml稀释后的孢子悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4，约为50－100cfu/ml，做活菌计数备用。 7细菌计数法： 7.1供试液制备 取供试品原液作为供试液。 7.2回收率测定：培养基稀释法 （1）试验组：取供试液1 ml等量分注2个平皿中，同时加入50－100cfu 试验菌，立即倾注营养琼脂培养基，置30－35℃培养箱培养24－72小时逐日观察结果。 （2）菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数。 （3）供试品对照组：取供试液1 ml等量分注2个平皿中，立即倾注营养琼脂，置30－35℃培养箱培养24－72小时逐日观察结果，测定供试品本底菌数。 （4）回收率的计算： 按如下公式计算试验组的加菌回收率： 为该株阳性菌的回收率。结果见表1。 8 霉菌、酵母菌计数法 ： 8.1 供试液的制备：取供试品原液作为供试液。 8.2 回收率的测定：平皿法 （1）试验组：取供试液1 ml和50－100cfu 试验菌同时加入平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，待凝固后，置23－28℃培养箱培养24－72小时，逐日观察结果。 （2）菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数。 （3）供试品对照组：取供试液1 ml加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24－72小时逐日观察结果，测定供试品本底菌数。 （4）回收率的计算 按如下公式计算试验组的加菌回收率： 为该株阳性菌的回收