绿豆提取液抗菌实验.docVIP

绿豆提取液的抗菌实验 金黄色葡萄球菌 1.1 实验方法选择 平板稀释法（琼脂稀释法）：琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。 1.2 实验准备 1.2.1 菌种 金黄色葡萄球菌（购买途径：广东环凯微生物科技有限公司-/） 1.2.2 培养基 Mueller-Hinton琼脂培养基-杭州天和微生物试剂有限公司 1.3 实验步骤 1.3.1 培养基制备 使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。 1.3.2 含药琼脂平板制备 根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。 1.3.3 接种物制备与接种 制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。接种好后置35℃孵育16~20h，观察结果。 0.5麦氏比浊管配制方法：BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml+H2SO4 (1%, V/V)99.5ml 将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。0.5个麦氏比浊度含菌量大约是1.5*108个/ml。 1.4结果判断 将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。 大肠杆菌 2.1实验方法的选择 肉汤稀释法 2.2菌种 大肠杆菌：（购买途径：广东环凯微生物科技有限公司-/） 2.3培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。