普通遗传学第十二章_基因工程教材教学课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 kb 23.1- 9.4 - 6.6 - 4.4 - 2.3 - 2.0 - 转基因棉花的Southern杂交检测（M为分子量标准，1为阳性对照，2为阴性对照，3-8为转基因植株） Northern杂交是一种RNA-DNA杂交。 将提取的植物总RNA或mRNA用变性凝胶电泳分离，则不同的RNA分子将按分子量大小依次排布在凝胶上； 将它们原位转移到固相膜上；在适宜的离子强度及温度条件下，用探针与膜杂交； 然后通过探针的标记性质检出杂交体。。 Northern杂交 从转基因植物中提取总蛋白质，经纯化处理后，进行SDS(十二烷基磺酸钠)聚丙烯酰胺凝胶电泳使蛋白质按分子量大小分离，将凝胶上的蛋白质转移到膜上，按特定的程序与抗体杂交，对杂交结果进行检测便可得知被检植物组织内目的蛋白表达与否及其表达量。 Western杂交 Flower Leaf Stem Root 鉴定转移的目的基因、选择标记基因是否表达。 观察是否发生外源基因以外的变异。转基因生物还可能因为细胞培养或T-DNA的插入而造成其它性状的突变。最好选出其它性状均未改变而仅产生目的基因性状的转基因材料。 但是，不应忽视转基因过程中产生的其它变异的应用价值，如转基因抗虫棉的研究中就可筛选到既抗虫纤维品质的某方面也改善的品系。 二 生物学性状鉴定 转基因抗虫棉 非转基因对照棉 转基因棉花饲喂棉铃虫时被食用情况（左图为转基因抗虫棉，右图为非转基因棉） 第 5节 基因工程的应用 第五节 基因工程的应用 一、基因工程的应用 1、转基因植物 抗除草剂、抗虫、抗病、 抗逆的优良品系或品种， 很多已经大面积种植推 广。 2002年5000万公顷： 大豆、玉米、棉花、 水稻、马铃薯、番茄、 小麦等 2、转基因动物：羊、牛 转基因动物比转基因植物的发展要缓慢些，这不仅涉及到技术问题，也涉及到伦理和宗教问题。 转基因动物通常是将目的基因构建到载体上，然后用微量注射法将重组DNA导入受体合子细胞核中，借助母体环境实现转基因动物生产。 转基因动物遇到的技术难题是动物体细胞再生并不像植物那么容易，而且动物的繁殖数量十分有限。克隆动物的成功（1997年克隆羊多利）和转基因鱼在生产上的应用是动物基因工程的典范示例。 2、转基因动物 例如：已把人的抗胰蛋白酶α-1基因转移到羊： 克隆在羊奶产生相关基因启动子的下游，这种启动子仅在乳腺细胞中表达。将这个嵌合基因注射到已授精的羊的合子中，再放植到母羊体内，产下的转基因羊发育正常。交配后产生的羊奶中含有大量有功能的人类抗胰蛋白酶(每升35克)，这一结果说明可利用家禽作为生物反应器，生产人类大量需要的重要蛋白质。 人类生长激素基因转移到老鼠和猪 ◆在动物体内胰岛素是胰腺细胞先形成一种前体胰岛素，再加工成两条不同的成熟胰岛素原分子，A链含21个氨基酸残基，B链含30个氨基酸残基，经两对二硫键连接形成成熟的胰岛素。 3、基因工程工业 在细菌中生产胰岛素 在大肠杆菌中生产人类生长激素 基因治疗（gene therapy）是利用功能基因或正常基因，通过生物技术手段，置换缺陷基因，从而达到矫正遗传疾病的目的。 遗传矫正途径：（1）替代治疗，即用功能正常的基因替代缺陷基因；（2）靶标基因修复，即用分子工具修正基因组中的突变基因。 4. 疾病诊断与基因治疗 遗传疾病诊断 RFLP 法 遗传疾病诊断 利用PCR技术鉴定等位基因特异寡核苷酸法 生物治疗：利用微生物降解环境中的毒素和危险化合物。 废物处理：也是利用微生物降解废物，使之转化为二氧化碳和甲烷，后者可以用作生物能源燃料。 制作诊断工具：研制人类、动植物主要流行性疾病的早期探测试剂盒，做到疾病的早期预防和控制。 植物诊断：利用植物消除环境中的污染或使其转化为无害的物质。比如，利用某些植物吸收土壤中的重金属，可以缓解土壤中的重金属污染。利用生物工程技术生产工程菌，用作肥料，提高肥料的利用率，降低化学肥料使用量，从而降低肥料对地下水的污染。 5. 生物工程与环境保护（降解毒素、有毒化合物、重金属元素等） 二、安全问题 1、转基因植物成为杂草。 2、导致新的病虫害， 威胁生物多样性。 3、食品安全性。 Genetic Engineering gone wrong? Chimparus Shrimpit Cat Fish 本章重点 基因工程的一般步骤 限制酶和载体 基因分离 转基因 作业 Now that would be a cool bit of human