食品微生物检测技术推荐.ppt

第五章 食品微生物检测技术 讲授提纲 一、相关食品国家标准 二、食品微生物常规检验内容与步骤 三、菌落总数检验 四、大肠菌群检验 五、病原菌检验 一、相关食品质量标准 二、食品微生物常规检验内容与步骤 三、菌落总数检验 样品稀释程序 第四章 有害物质的测定 一、测定意义 二、农药残留量的测定 （一）有机氯农药残留量的测定 1、气相色谱法 2、薄层色谱法 3、高效液相色谱法 （二）有机磷农药残留量的测定 1、气相色谱法 2、薄层色谱法 3、高效液相色谱法 三、有害元素的测定 （一）铅的测定 1、双硫腙比色法 ①原理：样品经消化后，在pH=8～9时Pb2+ + 双硫腙→红色螯合物，可被三氯甲烷、四氯化碳等有机溶剂萃取，加入盐酸羟胺、氰化钾、柠檬酸铵，可防止Fe、Cu、Zn等干扰，比较颜色深浅可测Pb浓度 ②测定 吸取10μg/ml Pb标准溶液0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5ml分液漏斗中，加入1％HNO3 20ml加入柠檬酸铵/盐酸羟胺/氰化钾/三氯甲烷于λ=510nm测A 同样测待测液，绘制标准溶液 2、原子吸收分光光度法（259-262） 四、黄曲霉毒素AFT B1的测定（P236-239) （一）方法原理（薄层色谱法） 经有机溶剂提取、净化、浓缩，经薄层色谱分离，在365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，据薄层板上显示荧光的最低检出量测定黄曲霉毒素B1的含量。 （二）样品预处理 1、提取：根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用己烷、石油醚脱除。用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋白质大分子包围）AFT B1 2、净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT, 采用液—液分配萃取法 3、浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液 （三）样品测定 1、薄层板的制备 选择吸附剂（硅胶G） 加水成糊，涂布薄层 2、点样（P238) 3、展开 4、观察 5、验证试验 6、定量（四）计算 (239) XB1 = (0.0004×1000) / [(V1×w) / V2] 食品分析方法的建立 食品分析方法的建立主要从两个方面考虑 1、样品处理 是食品分析的前提 应根据不同样品采用不同方法进行样品处理，采取的措施：分离、掩蔽 A.待测组分的性质 如黄曲霉毒素AFT B1,难溶于水、己烷、戊烷、石油醚、乙醚 易溶于氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、油对光、热、酸稳定,对碱、氧化剂不稳定,在365nm紫外光照射下（激发λ=425nm） B.被测食品样品的特征 根据不同食品样品的不同特征，采取相应的样品处理方法;提取：根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用己烷、石油醚脱除。 用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋白质大分子包围）AFT B1 净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT,采用液—液分配法,色谱柱分离 浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液 2、选择适宜的测定方法 ①建立测定方法的依据 根据待测组分的性质特点及要求进行选择 ②建立分析方法的原理及技术 A.分离方法、分析方法的确定 一般采用提取、净化、浓缩步骤 如：AFTB1可采用荧光分光光度法进行测定。 激发λ=365nm，发射λ425nm 可采用薄层色谱法进行定性、定量分析。关键是选择良好的吸附剂（硅胶G）和适宜的展开剂（乙醚、丙酮+氯仿） B.进样量的确定 稀释定量：样液中AFTB1荧光点强度与AFTB1标准点最低检出量（0.0004μg）的荧光强度一致（5μg/Kg）若不一致，再稀释至一致为止。 C.论证所用方法的可靠性 通常采用测定回收率方法。还可与仲裁方法（或标准方法）比较。（如不溶性膳食纤维测定） 思考题： 1、简述有机氯农药残留量的测定方法。 2、简述有机磷农药残留量的测定方法。 3、简述有害元素的测定方法。 4、简述 铅的测定方法。 5、简述黄曲霉毒素AFT B1的测定方法。 * * 表2 微生物指标 表2 罐装植物蛋白质饮料微生物指标。??? 20 ???? 霉菌、酵母（个/mL）≤ 不得检出 ???? 致病菌（系指肠道致病菌及致病性球菌） 3 ???? 大肠菌群（个/100mL）?≤ 100 ???? 菌落总数（个/mL）≤ 指? 标 项? 目 植物蛋白饮料卫生标准【GB 16322—1996】 3.3 微生物指标??? 微生物指标罐装植物蛋白质饮料应符合商业无菌，其他包装应符合表2的规定。???