[医药]资深ELISA Kit研发专家技术交流.doc

资深ELISA Kit研发专家——BJEIA和简简单单2006与您在线交流ELISA实验技术 我现在正在做间接竞争ELISA的标准曲线,我已经做了好多次了,但是线性总是不好.具体过程如下:抗原包被:0.2μg/ml;一抗稀释度:1:3200(方阵滴定求得)竞争抗原稀释:10、5、2、1、0.5、0.2、0.1、0.01、0.001、0μg/ml结果：竞争抗原在10-0.2μg/ml之间线性还行，到0.1μg/ml时OD值应该上升的，但是却下降了。好几次的结果都是如此。竞争抗原浓度：10?5?2?1?0.5?0.2?0.1?0.01?0.001?0μg/mlOD值：0.369?0.437?0.602?0.69?0.744?0.802?0.788?0.815?0.791?0.86请多指教，谢谢！不胜感激！ 如此热心的战友，我鼓掌欢迎！！请教BJEIA战友：半对数曲线应该是什么样的？感谢BJEIA 战友支持，很好的学习机会，请大家踊跃提问。请教：ELISA试剂盒如何挑选？BJEIA战友起了个好头,我也来顶一下!!为什么没有人回答问题呢?急切期盼各位战友回复我是第一个提问题的,如上(ghbu)多谢您的答复!ghbu的问题：0.1ug/ml处己经到达竞争法的灵敏度极限，0.1-0.001ug/ml处的OD值变化是随机误差。酶标板的包被量CV在4%左右。加上实验的加样等的变异，一般夹心法的CV在5-10%，竞争法的CV在7-15%。所以在竞争法进行定量检测时，一般以0ug/ml的OD值的80%为线性上限。所以你的模型线性系列首点应设在0.5ug/ml或1ug/ml。=======================抗原包被:0.2μg/ml;一抗稀释度:1:3200(方阵滴定求得)竞争抗原稀释:10、5、2、1、0.5、0.2、0.1、0.01、0.001、0μg/ml结果：竞争抗原在10-0.2μg/ml之间线性还行，到0.1μg/ml时OD值应该上升的，但是却下降了。好几次的结果都是如此。竞争抗原浓度：10 5 2 1 0.5 0.2 0.1 0.01 0.001 0μg/mlOD值：0.369 0.437 0.602 0.69 0.744 0.802 0.788 0.815 0.791 0.86dingyanning:在进行定量曲线拟合时，可以有多种方式。半对数曲线是指对浓度取对数，吸光度则不进行处理。方程为：OD = A*log(浓度）+BELISA试剂的选择，定性试剂考虑：阳性符合率，阴性符合率，灵敏度，精密度。定量试剂需要考虑：准确性，精密性，曲线区间，灵敏度等。具体到什么指标最为重要，要看具体的检测项目与目的。如定量科研试剂要求可以放宽，主要看拟合曲线斜率要大，使测定准确度高一些。用于临床的试剂盒当然是临床符合率最为重要。如果做过多次都是这样的情况,那么很简单,通过你的实验恰恰说明了,在10-0.2μg/ml之间呈线性关系,并且半数抑制在5-10μg/ml.各位大侠，我有个疑问想请教一下。血液标本在-80度冰箱放了2年，请问用ELISA 法测血浆中某个因子的浓度，冻存样本会不会对测量值有影响？不用新鲜样本可不可以？大家好！谢谢各位高手的指点。还有点问题如下：1.我还想问一下10-0.2μg/ml之间呈线性关系,这个范围是不是太高了，我看好多资料的线性范围都在0.1-0.01μg/ml或0.01-0.001μg/m这样一个比较低的区间。 我觉得线性范围太高没有实际意义，因为以后检测样品时其中的抗原浓度低的话就不好检测了。2.标准品在较低浓度下（0.1 0.01 0.001μg/ml），OD值没有显著的变化，有人说是因为抗原和标准品（竞争抗原）之间没有很好的竞争关系，可能是包被浓度大了，但是我的包被浓度已经降到了0.2μg/ml，比较低了。3.请问一下半数抑制是什么意思，怎么计算？谢谢您！恳请详细回复！请问BJEIA大侠，你的联系方式可否告之？大家好！谢谢各位高手的指点。还有点问题如下：1.我还想问一下10-0.2μg/ml之间呈线性关系,这个范围是不是太高了，我看好多资料的线性范围都在0.1-0.01μg/ml或0.01-0.001μg/m这样一个比较低的区间。 我觉得线性范围太高没有实际意义，因为以后检测样品时其中的抗原浓度低的话就不好检测了。2.标准品在较低浓度下（0.1 0.01 0.001μg/ml），OD值没有显著的变化，有人说是因为抗原和标准品（竞争抗原）之间没有很好的竞争关系，可能是包被浓度大了，但是我的包被浓度已经降到了0.2μg/ml，比较低了。3.请问一下半数抑制是什么意思，怎么计算？谢谢您！恳请详细回复！1:是有点高,这是由你的抗体的特异性和灵