一、3730测序原理及仪器概述.pptVIP

3730XL测序原理 测序原理 模板DNA 引物primer dATP ,dTTP, dCTP, dGTP 带荧光标记的 ddNTP Sanger测序——双脱氧末端终止法 ddNTP被加到正在合成的链上，由于它的3’-OH已被氧化，下一个dNTP的5’-磷酸基团不能与之形成磷酸二酯键，使合成终止。 在引物等延伸反应过程中，ddNTP在不同位置掺入，产生了一系列不同长度的新的DNA片段。 5’ 3’ 5’ 3’ 3730XL测序原理 电进样及电泳 用“电进样”的方法将带电的样品分子加到 灌好电泳胶的毛细管的进样端（负极）。 然后在毛细管两端加上直流电压，样品中不同 大小的DNA片段开始由负极向正极移动，移 动的速度受到片段自身大小的影响，片段越 短移动的越快。 电泳的结果是使长度不同的带电DNA片段互相 分离，并且按片段的长短的顺序通过检测窗口， 产生信号，短片段先达到检测窗口 检测窗口 双束激光激发 负极 正极 光栅全波长分光 低温CCD实时检测 电泳方向 大小相差1bp的带 荧光标记的DNA单链 CCD检测器把检测到的荧光信号转换为电信号，并把它传送给安装了Data Collection（简称DC） DC接收到信号后，用预先设置好的方式进行初步处理，并把这些数据存贮在计算机的数据库里 DC会自动地从数据库中提取这些数据，并根据不同的运行模式，完成对样品DNA的碱基序列或片断信息的分析， 然后把分析完成后的结果数据以样品文件的形式保存于计算机的硬盘中 认识3730XL 照明灯开关 状态指示灯 电源开关 进样器按钮 Buffer 槽 Water 槽 样品舱门 指示灯 Waste槽 加热炉门 样品仓门 灌胶泵系统 加热炉 泵胶块 胶管 胶瓶 阳极缓冲液杯 下胶块 连接管 毛细管 加热炉内仓 96道毛细管同时检测 上部光束减弱 下部光束减弱 双侧光束均匀 双束激光两侧同时激发：灵敏度+均匀性+超速测序 谢谢！