实验3染色体制片技术.pptVIP

实验三 植物染色体压片法 一、原理 二、目的：掌握染色体制片方法，观察染色体动态变化。 三、材料：蚕豆根尖 具有自我复制能力是生命的一个基本特征。单细胞生物可以通过细胞分裂直接复制自身，而多细胞生物从受精卵开始，经过有丝分裂使细胞不断增殖并经过一系列复杂的分化过程形成新一代个体。 一般来说，只要能够进行细胞分裂的植物组织或是单个细胞都可以作为观察染色体的材料。如植物的顶端分生组织（根尖或茎尖）、居间分生组织（禾本科植物的幼茎及叶壳）、愈伤组织和胚乳、萌发的花粉管等，在这些组织内不断进行着细胞分裂。只要适时取材，并加以固定、离析、染色等处理后制成染色体玻片标本，即可利用显微镜对有丝分裂和染色体进行观察。 这是细胞遗传学最基本和常用的方法，在物种亲缘关系鉴定、染色体变异、杂种分析等工作中有着广泛的用途。 四、步骤： 材料培养： 蚕豆种子充分浸种，发芽后埋在干净的湿沙(25度）中培养，待根长到1-1.5cm时，进行前处理。 2 前处理 ： 剪下根，在14点30分至17点30分用0.05%秋水仙碱浸泡。 固定 ： 乙醇-冰乙酸（3：1）固定液固定4-24小时，以后转入70%乙醇中冰箱保存。 酸解： 注意酸的浓度、温度、处理时间 将固定的幼根放入ep管中，用dH 2 O 浸洗2次，除去水后加入1 mol/L HCL 将幼根泡住，放入60OC水浴中水解8-12 min 左右（水解时间与水温有反相关关系），待幼根软化（同时变为半透明）即可取出，用dH 2 O 浸洗幼根2次，5min/次。 5、压片：将根尖放在载片中央，切取根尖部分，滴上几滴染色液(醋酸洋红或苯酚品红红），染色15分钟，盖上盖玻片。一个解离良好的材料，只要用镊子尖轻轻地敲打盖片，分生组织细胞就可铺展成薄薄的一层，再用吸水纸把多余的染液吸掉，经显微镜镜检后，选择理想的分裂细胞，再在这个细胞附近轻轻敲打，使重叠的染色体渐渐分散，就能得到理想的分裂相，必须掌握以下2点： 1）压片材料要少，避免细胞紧贴在一起，致使细胞和染色体没有伸展的余地； 2）用镊子敲打盖片时，用力要均匀，若在压片时不注意，使个别染色体丢失，而被迫放弃一个良好的分裂相的细胞。 作业： 绘出分裂中期染色体图 思考题 1、前处理目的？ 2、解离的目的，解离的方法有哪些？ 根尖是指从根的顶端到着生根毛部分的这一段。无论主根、侧根和不定根都具有根尖，它是根的生命活动中最活跃的部分。根的伸长、根对水分和养料的吸收以及根内的组织分化主要都是在根尖进行的。因此根尖的损伤影响根的发育。根尖可以分为四个部分：根冠、分生区、伸长区和根毛区。 （一） 根冠　　由薄壁细胞组成的帽状结构。位于根尖的顶端，包围着根尖的分生区。根冠的细胞排列很不规则，外层细胞排列疏松，常分泌黏液，使根冠表面光滑，减少根向土壤中生长时所发生的磨擦。当根尖向下生长时，根冠外层细胞常常遭受磨损而不断解体死亡和脱落。但由于分区的细胞不断地分裂，因此，根冠细胞机以陆续得到补充，始终保持一定的形状和厚度。所以，根冠是保护根的顶端分生组织和帮助正在生长的根较顺利地穿越土壤，并减少损伤的结构。此外，根冠细胞内常含有淀粉粒，可能有重力感应作用，控制根向地心的方向生长。 二）分生区　　分生区位于根冠内侧，全长1-2毫米。是分裂产生新细胞的主要地方，又称生长点。分生区是典型的顶端分生组织，因此细胞具有顶端分生组织的特点。分生区产生的新细胞，除一部分向前发展，形成根冠细胞，以补偿根冠因受损伤而脱落的细胞外，大部分向后发展，经过细胞的生长、分化，逐渐形成根的各种结构。　　种子植物根尖分生区的最前端为顶端分生组织的原始细胞，由原始细胞分化出分生区稍后部的原表皮、基本分生组织和原形成层三种初生组织，再进一步分化成初生的成熟组织。 　　原表皮最外一层细胞为扁平的长方形，将来分化为根的表皮；基本分生组织细胞较大，呈短圆筒形，将来分化成根的基本组织；原形层位于中央，细胞长梭形，直径较小，密集成束，将来分化成根的维管组织。 （三）伸长区　　伸长区位于分生区稍后部分。此区细胞分裂活动愈来愈弱，并逐渐停止，而细胞体积却不断扩大，并显着地沿着根的纵轴方向伸长。根的长度生长是分生区细胞的分裂、增大和伸长区细胞的延伸共同活动的结果。特别是伸长区细胞的延伸，使根能显着地伸长，因而在土壤中能不断向前推进，促进根的吸收。 　　伸长区的长度为2～5毫米，外观较为透明洁白，可与生长点相区别。根的伸长区长度较茎尖伸长区短得多，这是因为根在土壤中生长时受土壤的阻力较大，伸长区太长易弯曲。短而粗的伸长区，对于根部向坚实的土层推进是比较有利的，此区细胞除显着伸长外，在后端的部分细胞已加速