WesternBlot试剂-自己总结.doc

Western Blot 试剂 1、水（ddH2O） 2、?丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。、?分离胶缓冲液1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后4保存。4、?浓缩胶缓冲液0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后4保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris.CL。、10%(w/v)?十二烷基硫酸钠SDS溶液0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。10%(w/v)过硫酸胺溶液提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基、?TEMED原溶液N，N，N’N’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。3.03gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1，得0.25mol/L Tris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液。、?转移缓冲液gTris、g甘氨酸、200ml甲醇，加水至总量1L。、?SDS加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液ml SDS 1.2g 0.05%溴酚蓝H2O 3ml 甘油9、?丽春红染液储存液：丽春红S 2g 三氯乙酸30g 磺基水杨酸 30g 加水至100ml 用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。10、?脱脂奶粉5%(w/v)。11、?NaN3 0.02% 叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、?Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、?Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、?过氧化物酶标记的第二抗体。15、?NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。16、?BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。17、?100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。18、?100mmol/L NaCl。19、?50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/L EDTA。（可以参看分子克隆）