磷光化学发光.PPT

NO检测灵敏度1ng·mL-1 （2）利用氧原子的化学发光 2 液相化学发光 化学发光反应在液相中进行。 例如，鲁米诺在碱性溶液中可被H2O2、I2等氧化，可发射最 大吸收波长为425nm光辐射。反应如下： （1）氮氧化物的化学发光 可检测至10-9 mol·L-1 该反应可以被痕量过渡金属离子所催化，利用这一现象可测 定许多金属离子。还可以测定氨基酸。 6.3 生物发光简介 涉及到酶和生物反应的一类化学发光。如萤火虫反应： L：萤火虫荧光素；E：萤火虫荧光素酶；PPI代谢产生的无机 焦磷酸；对10μgATP样品，检出限10-14 μg。 * 第6章 分子发光分析 （Molecular Luminescence Analysis） 6.1 分子荧光及磷光分析 一、基本原理 二、荧光仪器 三、磷光分析 6.2 化学发光分析 一、概述 二、基本原理 三、化学发光的类型 四、化学发光测定仪器 6.3 生物发光简介 6.1 分子荧光分析及磷光分析 分子发光：处于基态的分子吸收能量（电、热、化学和光 能等）被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回 至基态并发射出光子，此种现象称为发光。发光分析 包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。 物质分子吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光。 一、基本原理 1. 分子能级、荧光及磷光的产生 分子能级=电子能级(Ee)+振动能级(Ev)+转动能级(Er)。 其中电子能级包含振-转能级，如图。 激发三重态：分子吸收能 量，电子自旋不再配对， 为三重态，称为激发三 重态，以T1，T2….表示。 基态：电子自旋配对， 多重度=2s+1=1，为单 重态，以S0表示。 激发单重态：分子吸收能 量，电子自旋仍然配对， 为单重态，称为激发单 重态，以S1，S2…表示 三重态能级低于单重态（Hund规则） 2. 去活化过程（Deactivation） 处于激发态分子不稳定，通过辐射或非辐射跃迁等去活化过程返回至基态 。这些过程包括： 1）振动弛豫（Vibrational Relaxation, VR） 在液相或压力足够高的气相中，处于激发态的分子因碰撞将剩余的振动能量以热的形式传递给周围的分子，从而从高振动能层失活至低振动能层的过程，称为振动弛豫。 2）内转换（Internal Conversion，IC） 对于具有相同多重度的分子，若较高电子能级的低振动能层与较低电子能级的高振动能层相重叠时，常发生电子从高电子能级以无辐射跃迁形式转移至低电子能级。如S2-S1；T2-T1。 3）荧光发射 分子电子从单重激发态（Kasha规则）的最低振动能级在很短时间（10-9-10-6s）跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为荧光。由于各种去活化过程的存在，荧光辐射能通常要比激发能量低，或者说，荧光波长大于激发波长（Stokes效应）。 4）系间跨跃（Intersystem Conversion，ISC） 系间跨跃是发生在两个不同多重态之间的无辐射跃迁，如从S1到T1，该跃迁是禁阻的。然而，当不同多重态的两个电子能层有较大重叠时，处于这两个能层上的受激电子的自旋方向发生变化，即可通过自旋-轨道耦合而产生无辐射跃迁，该过程称为系间跨跃。 5）磷光发射 从单重态到三重态分子间发生系间跨跃跃迁后，再经振动弛豫回到三重态最低振动能层，最后，在10-4-10s内跃迁到基态的各振动能层所产生的辐射。 6）外转换（External Conversion，EC） 受激分子与溶剂或其它分子相互作用发生能量转换而使荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程，也称“熄灭”或“猝灭”。 3. 定性分析 荧光和磷光均属于光致发光。任何荧（磷）光都具有两种特征光谱：激发光谱与发射光谱－－荧（磷）光定性分析的基础。 1）激发光谱 通过测量荧光(或磷光)体的发光强度随激发光波长的变化而获得的光谱，称为激发光谱。 具体测绘方法：通过扫描激发单色器，使不同波长的入射光照射激发荧光(磷光)体，发出的荧光(磷光)通过固定波长的发射单色器而照射到检测器上，检测其荧光(磷光)强度，最后通过记录仪记录光强度对激发光波长的关系曲线，即为激发光谱。通过激发光谱，选择最佳激发波长——发射荧光(磷光)强度最大的激发光波长，常用λex表示。 2）发射光谱 ，也称荧光光谱或磷光光谱 通过测量荧光(或磷光)体的发光强度随发射光波长的变化而获得的光谱，称为发射光谱。其测绘方法，是固定激发光的波长，扫描发射光的波长，记录发射光强度对发射光波